不同浓度紫杉醇预处理对绵羊卵母细胞玻璃化冷冻保存效果的影响.pdfVIP

蘩耀燕溪 ·Rep0 9nandPhysioiogy 2010龟 46卷 第21期 不同浓度紫杉醇预处理对绵羊卵母细胞 玻璃化冷冻保存效果的影响 莫显红 ，李俊杰 ，夏 威 。，袁佃帅 ，梁 莹 ，贾宝瑜 ，朱士恩 (1．河北农业大学动物科技学院，河北保定 071000； 2．中国农业大学动物科技学院，北京 100193) 摘 要 ：细胞骨架系统的稳定对于提 高卵母细胞或胚胎冷冻后的存活率及其发育能力具有重要作用。紫杉醇 (Taxo1)作为细胞骨架稳定剂，可增强 、一微管蛋 白二聚体的紧密联系，增大微管交联，促进微管聚合和稳定。本 实验以绵羊体外成熟卵母细胞为材料 ，旨在探讨紫杉醇预处理对玻璃化冷冻绵羊卵母细胞存活率、形态正常率及 体外受精后胚胎发育率的影响。采用0、0．5、1．0、15Ixmol／L的紫杉醇预处理绵羊卵母细胞并进行玻璃化冷冻保 存，未经处理的新鲜卵母细胞为对照组。结果表明：采用浓度为 05Ixmol／L紫杉醇预处理绵羊卵母细胞冷冻保存 效果最佳，其解冻后的存活率 (82．38％)与其他3个试验组相比有显著差异性 (PO．05)；体外受精卵裂率 f5117％)和桑囊胚率(20，30％)也显著 高于其他 3个试验纽 (PO．05)，但低 于对照组 (69．42％，34．77％)(P O．05)。由此可见，以O．5lamol／L浓度的紫杉醇预处理组绵羊体外成熟卵母细胞冷冻后能获得较好的效果。 关键词：紫杉醇；卵母细胞；玻璃化冷冻；绵羊 中图分类号：$826．3 文献标识码 ：A 文章编号：0258—7033(2010)21—0024—04 由于卵母细胞的来源受季节性和地域性的影响 率及体外受精胚胎发育能力的影响 较为明显，为了能够使卵母细胞的供给不受时间和 1 材料与方法 空间的限制 ，对卵母细胞进行玻璃化冷冻保存足行 之有效的方法之一。卵母细胞的玻璃化冷冻保存广 1．1 试剂 实验所用 TCM199购 自Gibco公 司，胎 泛应用于人类的辅助生殖等医学领域 ，同时也为胚 牛血清 (FBS，Hyeolon)，促卵泡素 (FSH，Folltropin—V， 胎体外生产、转基因、克隆等胚胎生物技术提供了充 加拿大产)，促黄体素 (LH，Lutropin—V，加拿大产)， 足廉价的实验材料，并为珍稀和濒危物种种质资源 其他试剂均购 自Sigma公司。 保存提供了有效的技术手段。目前 ，许多成熟阶段的 1．2 卵母细胞的来源及成熟 将屠宰场摘取 的卵 卵母细胞lll和未成熟卵母细胞l2_经冷冻处理后均得 巢放入 35cc含双抗的生理盐水中，4～5h带 回实验 到了正常后代，但其成功率仍然很低。大多数卵母 室。用刀片划破卵巢表面 2-6inm卵泡，在实体显微 细胞在玻璃化冷冻过程中都将导致形态及功能上不 镜下选择胞质均匀 、带有3层及其以上完整致密的卵 同程度的损伤l3l。而冷冻造成细胞骨架损伤(微管解 丘颗粒细胞的卯母细胞复合体 (COOs)，移入 100tzL 聚导致纺锤体紊乱)被认为是冷冻效率降低的重要 成熟培养液 (TCM199+10p．g／mLFSH+10Ixg／mLLH+ 原因之一 。紫杉醇作为细胞骨架稳定剂 ，可以在很大 1~g／mLE+20ng／mLEGF)微滴中培养 ，每滴入孵 15 程度上降低冷冻对卵母细胞微管的损伤，并且可显著 枚卵母细胞 ，置于饱和湿度 ，5％CO：、38．5oI=的二氧 提高冷冻卵母细胞解冻后的发育能力 61。因此，本研 化碳培养箱内成熟培养24h。将成熟卵母细胞用透 究 以OPS为冷冻载体，研究不同浓度紫杉醇预处理