W-7对NMDA诱导的体外培养神经元损伤的神经保护作用及机制.pdfVIP

． 2508． 广东医兰 2010年10月第31卷第19期 GuangdongMedicalJournalOct．2010，Vo1．31，No．19 [13]FRIERSONHFJR，ELNAGGARAK，WELSHJB，eta1． 版 ，2000，39(6)：618—622． La~gescalemolecularanalysisidentifiesgeneswithalteredexpres· [15]BROCKSCHMIDTC，HIRNERH，HUBERN，eta1．Anti一印- sioninsalivaryadenoidcysticcarcinoma[J]．AmJPathol，2002， optoticandgrowth—stimulatoryfunctionsofCKIdehaandepsilon 161(4)：1315—1323． inductaladenocarcinomaofthepnacreasaleinhibitedbyIC261in [14]唐榕，应康，陈宣茂，等．用基因芯片的方法对人酪蛋白激酶 vitronadinvivo[J]．Gut，2008，57(6)：799—806． CKl71基因进行表达谱和聚类分析[J]．复旦学报 自然科学 (收稿 日期 ：2010—02—09 编辑：林培德) W一7对 NMDA诱导的体外培养神经元损伤的 神经保护作用及机制术 刘学文 ，郎森阳 ，韩锟 ，田步先 辽‘宁医学院附属第一医院神经 内科 (辽-7锦州 121001)； 中国人民解放军总医院神经 内科 (北京 100853) 摘【要】 目的 观察钙调蛋白抑制剂w一7对NMDA诱导的体外培养的皮质神经元损伤的保护作用，并探 讨药物作用机制。方法 取原代培养7d的大鼠皮质神经元随机分为5组：(1)对照组：仅用DMEM／F12完全培 养基。(2)NMDA纽：去除正常神经元培养液，加入NMDA50g,molZL。(3)保护组：w一7低中高剂量，分别为25、 50、100Ixmol／L，加入NMDA50p~mol／L。M1Tr法检测细胞存活力；试剂盒检测培养上清液中乳酸脱氢酶含量；用 免疫细胞化学染色法检测皮质神经元内p38MAPK蛋白的表达。结果 (1)同对照组比较，NMDA组神经细胞存 活力降低 (P0．叭)，w一7预处理组增加(P0．05)。(2)NMDA组培养上清液中LDH含量高于对照组，差异有 显著性(P0．01)；W一7干预组LDH含量低于NMDA组，差异有显著性 (P0．05)；(3)同对照组比较，NMDA组 NF—KB蛋白表达增加 (P0．01)；同NMDA组比较，w 一7干预组表达减少，差异有显著性 (P0．05，P0．01)。 结论 w一7可减轻 NMDA对培养的皮质神经元的损伤，对皮质神经元具有保护作用。其作用是通过抑制 NF— KB的蛋 白表达实现的。 【关键词】 w一7；NMDA；培养的神经元；LDH；p38MAPK N一甲基 ～D一天 (门)冬氨酸 (N—methyl—D— DMEM／F12(1：1)培养基：美国Hyclone公司；0．25％胰 aspartate，NMDA)是一种兴奋性氨基酸，可以作用于突 蛋 白酶：美国Gibco公司；阿糖胞苷、w一7、NMDA：美国 触后神经元的受体，激活受体门控性钙通道引起胞内 sigma公司；乳鼠(辽宁医学院实验动物中心，SPF级)。 钙超载，ca“大量内流，激活NMDAR，Ca“内流以及代 1．2 原代大鼠脑皮质神经细胞培养 神经元培养：参 谢型谷氨酸受体激活引起胞内ca 释放，使胞内ca 照文献记载的方法 略加改动。取 24h之内的新生 浓度持续升高，引起一系列毒性反应。丝裂原活化蛋 SD大鼠，于无菌条件下取出大脑皮层去除血管和软脑 白激酶(mitogen—activatedproteinkinase，MAPK)信号 膜后剪碎成约 0．5mm ，用 D～Hank’S液洗 2遍 ，置于 转导途径广泛表达，各种细胞外刺激信号，包括神经递 0．125％胰蛋 白酶中消化，37℃孵 育 10min，加入含 质、神经营养因子、生长因子等均可通过这一通路影响 10％胎牛血清的培养基终止胰酶消化，离心去上清。 突触