CHO细胞表面与人CD59结合的活性短肽序列的筛选.pdfVIP

维普资讯 第 43卷 第 3期 青 岛 大 学 医 学 院 学 报 V0I_43，No．3 2007年 6月 ACTAACADEMIAEMEDICINAEQINGDAO UNIVERSITATIS June 2007 CHO细胞表面与人CD59结合的活性短肽序列的筛选 崔林林。高美华 。赵鹏 (青岛大学医学院免疫学教研室 ，山东 青岛 266071) [摘要] 目的 筛选获得高表达人 CD59中国仓 鼠卵巢细胞 (CHO)表面与人 CD59特异性结合 的短肽序列， 为下一步研究与肿瘤逃逸相关的CD59活性位点的短肽药物提供实验依据 。方法 以离子层析柱纯化的CHO细 胞的裂解蛋 白纯蛋白为靶分子分别进行 5轮亲和筛选 ，并进行竞争结合实验 ，双夹心 ELISA方法鉴定噬菌体 阳性 克隆。提取阳性单克隆单链 DNA测序 ，并推导出短肽序列。结果 随机挑选 的 16个单克隆中有 1O个克隆对 CHO细胞纯蛋 白有特异性结合力，经测序得到两条高度 同源 的多肽序列 。结论 通过噬菌体随机肽库对 CHO细 胞进行纯蛋白筛选得到了能与人 CD59特异性结合 的短肽序列 。 [关键词] 噬菌体肽库 ；蛋 白质 CD59；短肽封条 [中图分类号] R392．12 [文献标识码] A [文章编号] 1672—4488(2007)03—0196—03 SCREENINGFORSHORTACTIVEPEPTIDESEQUENCEWITHBINDINGTOHUMANCD59OFTHESURFACEOFCHOCELL CUIL，N—LIN ，GAOMEI—HUA ，ZHAOPENG (DepartmentofImmunology，QingdaoUniversityMedicalCollege，Qingdao 266O71．China) [ABSTRACT] Objective ToscreenthesequenceofshortactivepeptidebindingtohumanCD59ofthesurfaceofCHOcell， andprovide an experimentalbasis for designing an tumor-sneaking—through—related active short—peptide medicine ofCD59． Methods TakingCHO cellsproteinastargetcellsbyion-exchangechromatograph，afive—roundaffinityscreeningwasdoneran— dom ly．Afteracompetitivetest，positivephagecloneswereidentifiedbysandwichELISA andsequenced． Results Tenoutof16 phagecloneswereidentifiedtohavehighercombinationwithCD59． Conclusion ThesequenceofpeptidebindingtoCD59isob— tainedbyscreeningofCHO cellproteinthroughphagerandom peptidelibrary． [KEYWORDS] phagepeptidelibrary；proteinCD59；short—peptideclamp 新近发展 的噬菌体递呈随机肽库 (phagedis— TAGCGTAACG一3均购 自NewEnglandBiolabs公 playrandompeptidelibrary)技术 ，在受体表位的确 司。RPMI1640培养基购 自HYClone公 司。小牛 定和小分子肽类药物的设计中已突显优势。在受体