毛囊bulge 细胞培育与生物学特性的研究.pdfVIP

第 26 卷第 16 期 第 　三 　军 　医 　大 　学 　学 　报 Vol. 26 , No. 16 　　　　 　　　　 2004 年 8 月 ACTA 　ACADEMIAE 　MEDICINAE 　MILITARIS 　TERTIAE Aug. 2004 1499 ( ) 文章编号 2004　　 技术方法 毛囊 Bulge 细胞培养与生物学特性的研究 Primary cell culture and biological character of bulgeoriginated cells from human hair follicles (第三军医大学基础部细胞生物学教研室 ,重庆 400038) 张 　艺 ,杨 　恬 　　 　　提 　要 : 目的 　探讨体外培养毛囊 Bulge 细胞的生物学性质。方法 　采用一步消化法 ,显微分割毛囊 Bulge 区进行原 代培养 ,观察细胞的形态特征、生长状况以及表达特性。结果 　原代培养的第 2 天便可见细胞生长 ,并表现出很强的增殖 潜能 ,其生长期可达两周以上 ;光镜下表现出原始细胞形态特征 ,培养早期细胞能强表达 K19 和 βintegrin ,并随培养时间 1 延长呈下降趋势 ;原位染色亦可见 ,K19 阳性细胞集中表达于毛囊Bulge 区。结论 　体外培养的毛囊 Bulge 细胞在形态、生 长状况和标志物表达上都表现出幼稚细胞的性质 ,提示毛囊中潜在的干细胞可能定位于 Bulge 区。 　　近年来 ,随着上皮生物学研究的深入 ,毛囊作为皮 14 　Bulge 细胞形态学观察 ( ) 肤重要的附属结构日益引起人们的重视。研究表明在 1. 4. 1 　在倒置显微镜 Olympus ,Japan 下直接观察活细胞的生 皮肤中除表皮基底层以外 ,毛囊中也存在具有多向分 长状态。 化能力的干细胞1 ～3 ,这些干细胞很可能定位于毛囊 1. 4. 2 　组织 HE 染色 　　取石蜡包埋好的组织 ,沿长轴纵切毛 囊 ,经脱蜡水合 ,苏木精染色 ,1 %盐酸乙醇分化后 ,伊红复染 , 中段的隆突区 , 即Bulge 区。同时 ,人们发现一些重要 光镜下观察组织形态特征。 的医学问题 ,如组织维持和更新、皮肤创伤愈合、皮肤 15 　免疫组化染色 肿瘤的发生和转移等都与毛囊 ,尤其是毛囊 Bulge 区 1. 5. 1 　ICC 染色 　　将显微分离的毛囊 bulge 区接种于盖玻片 密切相关4 。因此通过对Bulge 的研究 ,将有助于加 上 ,待细胞长出后 ,用 PBS 漂洗 5 min ×3 次 ,预冷丙酮固定 10 深对皮肤及其附属结构发育、再生的理解。但目前对 min 。以0. 3 %H O 甲醇、0. 3 %Triton X100 各室温孵育 30 min