不同治则中药单体对体外培育神经干细胞分化的影响.pdfVIP

天津中医药 2004年4月第2l卷第2期 ofTradltionalChineseMedlcine 21 No2 156 T1a圳InJournaI Apr2004，Vol 不同治则中药单体对体外培 养神经干细胞分化的影响 张艳军，范祥，胡利民，张师愚，张伯礼 (天津中医学院，天津300193) 摘要：[目的】研究不同治则中药对体外培养大鼠神经干细胞分化及成熟的影响。【方法】体外培养胎鼠神经干 PcR方法检测B—tublin、tau的表达，观察黄芩苷、栀子苷，黄芪甲苷、三七总皂苷对神经干细胞分化及成熟的影 响。I结果】结果表明，黄芩苷、栀子苷能诱导神经干细胞特异性分化成神经元，而联合应用黄芪甲苷、三七总皂苷能 进一步促进分化神经元的成熟。[结论】不同治则中药，针对神经再生的增殖、分化过程，联合用药，具有促进神经再 生的作用。 关键词：神经干细胞；清热泻火；益气活血；分化 文献标识码：A 015602 中围分类号：R285．5 文章编号：1672—1519(2004)02 现在已经证明成年动物或人中枢神经系统多区 低浓度lnlg／L。每组4复孔。 域存在着具有多向分化潜能的神经干细胞，至少在 1．3益气活血中药对分化的神经细胞成熟的影响 几个确定的区域内，神经再生一直贯穿整个生命过 将第三代神经干细胞按适当浓度种植到多聚赖氨酸 程。但一些研究表明，在正常情况下，神经干细胞的 包被的的24孔板，并加入有血清培养基(5％胎牛 数目太少，中枢神经系统内神经再生的发生频率很 血清+DMEM／Fl：)，同时将黄芩苷或栀子苷加入 低“】，虽然几种伤害性刺激，比如缺血，外伤，神经变 培养基中，7d后回撤黄芩苷、栀子苷，加入黄芪甲 性等”。5】，能够引起内源性神经干细胞的增殖，但是 苷、三七总皂苷，7d后收集细胞，以备提取总RNA 它们的神经再生能力似乎非常局限，并不足以产生 使用，设立空白对照组。各种单体的终浓度为：高浓 度10 自我修复效果，因为近80％新发生的神经细胞在短 pg／mL，低浓度1mg／L。每组4复孔。 1．4 RT—PcR 期内死亡”】。本研究体外培养胎鼠神经干细胞，应用 Trizol试剂提取细胞总RNA，核 不同治则中药，联合用药，分期干预，观察了对神经 酸分析仪对RNA样品定量。RT—PCR反应程序参 螓 干细胞分化及成熟的影响。 照试剂盒操作手册，反应体系为20“L，逆转录与 l材料与方法 PCR二步完成，扩增产物5pL加样于1％的琼脂糖 埝 1．1细胞培养无菌取出胎龄16～18d的wistar凝胶，常规电泳，紫外透射仪观察照相。引物由宝生 胎鼠，置于冰冷的无菌磷酸盐缓冲液(PBS)内，分物公司合成，引物设计为：8一tublin，上游，上游， 蜍 离双侧皮层，吹散，离心后将细胞悬浮于干细胞生长 培养基中[DMEM／F12+2％B27+20n／mL碱 性成纤维细胞生长因子(bFGF)+20ng／mL上皮tau，上游， 瓠 生长因子(EGF)]，过200目细胞筛，得到单个细胞CAG一3’，下游，5’ 悬液，以(