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第3 卷 第5 期 过 程 工 程 学 报 Vol.3 No.5 2003 年10 月 The Chinese Journal of Process Engineering Oct. 2003 产碱性脂肪酶菌株的筛选和培养 洪 骏, 夏黎明 (浙江大学材料与化工学院化学工程与生物工程系, 浙江 杭州 310027) 摘 要：以Rodamine B 平板筛选法获得了一株高活力碱性脂肪酶产生菌Pseudomonas sp. ZJU−02. 摇瓶产酶实验表明，适宜产酶培养基为(%) ：玉米浆3 ，植物油1, K HPO 0. 1, KCl 0.05, MgSO 0.05, 2 4 4 Tween80 0.05 ；最佳培养条件为温度26o o C、初始pH 6.5. 脂肪酶活力可高达86 IU/ml. 该酶在70 C o 以下、pH 7.0~ 10.5 范围内稳定；酶反应的适宜温度为40 C ，适宜pH 为9.5. 该酶制剂在洗涤剂和 制革工业中有良好的应用前景. 关键词：碱性脂肪酶；菌种筛选；酶学特性 中图分类号: TQ925 文献标识码: A 文章编号: 1009−606X(2003)05−0428−05 1 前 言 脂肪酶(EC3.1.1.3)是类脂化合物分解、合成和酯交换的催化剂，广泛应用于食品、轻纺、皮 革、香料、化妆品、洗涤剂、有机合成、医药等领域[1,2] . 自20 世纪 80 年代以来，由于洗涤剂、 皮革工业的迫切要求，碱性脂肪酶的研究引起了国内外学者的广泛兴趣. 假单胞杆菌产碱性脂肪酶 国内外虽已有研究，但酶活力均不高[3−5]. 本工作从实验室保藏菌种中筛选到一株产碱性脂肪酶能 力较强的假单胞杆菌ZJU−02 ，并进一步对其产酶条件和酶学性质进行了研究. 2 材料和方法 2.1 菌种 Pseudomonas sp. ZJU−02, Pseudomonas aeruginosa, Alcaligenes sp., Pichia stipitis, Candida shehatae, Pichia fabianii, Bacillus sp., 均为本实验室保藏菌种. 2.2 培养基 细菌培养基(g/L) ：蛋白胨5.0，酵母汁5.0，葡萄糖1.0, K HPO 1.0 ，琼脂15.0. 2 4 真菌培养基(g/L) ：PDA 培养基(马铃薯200 ，葡萄糖20 ，琼脂15). 种子培养基(g/L) ：谷氨酸钠5.0，KH2PO4 1.0, KCl 0.1 ，葡萄糖10.0. 产酶培养基(g/L) ：玉米浆30.0 ，尿素6.0 ，K HPO 1.0 ，KCl 0.5，MgSO 0.5 ，植物油10.0. 2 4 4 2.3 Rhodamine B 平板筛选法[6] o 在培养基中加入3%的植物油，灭菌后冷却至60 C，加入0.2%过滤灭菌的Rhodamine B 溶液， 制成平板. 用无菌牙签将菌种分别转移到Rhodamine B 筛选平板上，于30oC 条件下恒温培养72 h. 然后在350 nm 紫外光下观察，依据培养平板上形成的荧光圈大小进行菌
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