磺胺甲恶唑有机聚合物整体柱的制备以及在胰蛋白酶分离纯化中的应用.docVIP

  磺胺甲恶唑有机聚合物整体柱的制备以及 在胰蛋白酶分离纯化中的应用# 郭嘉亮，陈维佳，王婷婷，冉丹妮，江正瑾** 5 10 15 20 （暨南大学药学院，广州 510632） 摘要：以磺胺甲恶唑 (SMZ)、甲基丙烯酸缩水甘油酯 (GMA) 和乙二醇二甲基丙烯酸酯 (EDMA) 为功能单体，一步键合制备了磺胺甲恶唑聚合物毛细管整体柱，液相色谱的条件下用于蛋白 质的分离分析研究，发现除了胰蛋白酶，其他多种蛋白质和酶在该柱上无特异性吸附。实验 证明了该整体柱用于胰蛋白酶分离纯化的可能性。 关键词：色谱学；磺胺甲恶唑；整体柱；胰蛋白酶 中图分类号：Q503 The Study Preparation of Sulfamethazine-Affinity Monolithic Column and Its Application in Trypsin Purification GUO Jialiang, CHEN Weijia, WANG Tingting, RAN Danni, JIANG Zhengjin (College of Pharmacy, Jinan University, Guangzhou 510632) Abstract: Sulfamethoxazole (SMZ), glycidyl methacrylate (GMA) and ethylene glycol dimethacrylate (EDMA) were chosen as the monomers to prepare a novel SMZ containing affinity monolithic column. The column was then applied for the separation of protein using nano-HPLC method. The results showed that most of tested protein and enzyme have retention on this column apart from trypsin, that indicated SMZ monolithic column has great potential in separating and purifying trypsin. Key words: Chromatographia; Sulfamethoxazole; Monolithic column; Trypsin  25  0 引言 亲和色谱法 (Affinity Chromatography) [1] 作为层析用固定相从复杂混合物中选择性分析和纯化特定物质，因而成为了发展较快的现代 色谱技术之一。然而，常用的亲和配基大都是从特定组织中提取出来的价格昂贵的生物小分 子，如辅酶、抑制剂、抗体或抗原等，这也成为了该技术发展的重要瓶颈之一。 30 35 很多药物分子与识别、运载、信息传递和细胞功能调节相关，它与生物体内的一些蛋白 质互补配位体表现出高度的亲和特异性，从亲和色谱观点看可作为配体来分离目标蛋白质。 与传统的生物配基亲和色谱相比，药物小分子配体具有取材广泛、价格低廉、结合容量大、 稳定性好、易与载体偶联、适用范围广、通用性好等优点[2]。目前，已有大量文献报道了应 用药物小分子作为配基，用于纯化抗原抗体[3]、受体蛋白[4]以及功能不同的细胞等，并取得 了长足进展。 在常见的亲和色谱基质材料中，硅胶具有良好的色谱性能，但耐酸碱性差；树脂和琼脂 糖适用的 pH 范围较宽，但机械强度差[5]。整体柱 (Monolithic Column) 是由单体、交联剂、 基金项目：教育部博士点基金 (No.20114401120009)；暨南大学科研培育与创新基金 (No 作者简介：郭嘉亮（1983-），男，博士研究生，色谱制备和药物分析 通信联系人：江正瑾（1974-），男，教授，博士研究生导师，主要研究方向：现代色谱的理论及技术研究， 药物代谢及生物标志物/靶标研究. jzjjackson@ -1-   引发剂、致孔剂的混合物在色谱柱内通过原位聚合而成的连续床固定相，适合快速分析和流 速梯度模式[6]，与传统的填充柱相比，具有制备方法简单、易于改性、柱效高、渗透性好、 40 45 反压低、传质速度快等优点[7]，同时它还具有可控制孔径的优点，在生物大分子的分离分析 上具有很大的优势。因此，发展基于耐酸碱性和生物兼容性好的新型聚合物整体材料亲和色 谱，具有重要理论与实际意义。 磺胺甲恶唑 (Sulfamethoxazole, SMZ) 商品名为新诺明，属于常见的磺胺类药物。已被 报道对胰蛋白酶