基因治疗课件.pptVIP

(六)自杀基因的基因治疗 原理：即用（逆转录）病毒载体将编码某种酶的基因（自杀基因）转染到肿瘤细胞中，此酶可将一种无害的药物前体转变为细胞毒复合物，进而杀伤肿瘤细胞（肿瘤细胞不能复制而死亡）。这种基因载体只能在特定的组织或肿瘤中表达，而正常细胞中不表达。 如： 自杀基因 + 病毒载体 转染 重组载体 例如： 单纯疱疹病毒 哺乳动物细胞 HSV Gene-TK （在肿瘤细胞中表达，正常细胞中不表达） Gene—TK GCV（胸苷类似物） TdR P p GCV---p 抑制DNA合成 脱氧胸苷酸 肿瘤细胞死亡 邻近细胞死亡/凋亡（旁观者效应） XR ，患者凝血因子Ⅸ缺乏，Ⅸ因子基因定位在Xq26.3~q27.2。临床表现，易出血，凝血时间长，轻伤、小手术后常出血不止。发病率为1/30000。 例如：我国学者薛京伦实施的FⅨ的基因治疗。 逆转录病毒载体 +FⅨcDNA 重组体 5` LTR FⅨ neo SV PSO LTR 3` ①导入仓鼠细胞（CHO ）→FⅨ表达； ②导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外培养）→FⅨ表达； ③91年，导入乙型血友病患者皮肤成纤维细胞（体外培养）→回植病人皮下→FⅨ基因表达，FⅨ基表达水平达正常人的5%。 是我国基因治疗成功的例子。 法国一名接受基因治疗的患者得了白血病，这引起了巨大反响。因此，美国和日本先后决定暂时停止进行基因治疗。日本今后一面关注欧美的动向，一面决定是否恢复基因治疗。九月上旬，法国一名接手基因治疗的幼儿患了白血病，这一消息使日本的医务人员产生了动摇。当时，东北大学附属医院和北海道大学附属医院正准备对患者实施与法国相同的基因治疗方法。 　　法国接受基因治疗的幼儿是一名X染色体基因发生突变，无法制造出有免疫能力的淋巴球的疑难病患者。医生的治疗方案是：以病毒为载体，在形成血液细胞的造血干细胞中植入正常基因，来对患者进行治疗。然而，病毒进入了使造血干细胞变成白血球的基因中去，结果刺激了会反复繁殖的癌基因，导致白血球异常增多。 现在为治疗严重疾病，从伦理道德观念上接受了体细胞基因治疗。的确，之所以如此好的接受是因为从基因治疗中试验所产生的副作用是如此小，以致于基因工程目前存在的危险可用于非疾病的条件上，即用于功能增强和美容目的。1997年九月，由NIH RAC组织的第一次基因治疗政策会议瞄准了这一方向。结论是增强工程可以产生，但如果RAC和FAD（在其它国家里是小组织）不警惕的话，也可能使调节过程失控。举个例子，美国生物工程公司已经开发了一种把基因转入发囊细胞的技术，他们现在正在寻找用于临床目的的促头发生长的基因，这种基因能使癌症病人化疗后脱落的头发再生长出来。 2） 反义RNA表达载体 合成或PCR扩增获取反义RNA的DNA，将它克隆到表达载体，然后将表达载体用脂质体导入靶细胞，该DNA转录反义RNA，反义RNA即与相应的mRNA特异性结合，同样阻断某基因的翻译。 反义RNA用于基因治疗具有以下特点： 1） 具有特异性强 只阻断靶基因的翻译表达。 2） 安全性好 反义RNA只与特定mRNA结合，不改变 基因结构，最终会被RNase水解，不残留。　 2、反义RN