病原性真菌检验临床微生物学(第三军医大学.pptVIP

厌氧性细菌及检验 临床微生物教研室 袁小澎 一定义 有氧条件下不能生长，无氧条件(不是绝对）下才可以生长的一类细菌 1836年Pasteur提出 临床上日益受到重视，60%临床标本存在厌氧菌感染---------------------需要重视 二 分类 1 有芽孢厌氧性细菌 一个梭菌属包括83个种 2 无芽孢厌氧性细菌 40多个菌属，300多个菌 种和亚种 三 感染 分布 原因 临床症状 厌氧菌在正常人体内的分布 致病的原因 1 组织缺氧或氧化还原电势降低 穿刺伤等封闭性伤口，血管压迫，肿 瘤压迫等等 2 机体免疫力低下 临床的症状 1 感染部位产生大量气体，组织脓肿和坏 死，皮下有捻发音，是产气夹膜梭菌感 染的特征 2分泌物有恶臭，或为暗红色，分泌物涂 片经革兰氏染色，发现细菌，而培养阴 性的 3 其它等等 厌氧菌标本的采集和送检 标本的采集和送检------------ 1 标本决不能被正常菌群污染； 2 应尽量避免空气 标本的采集 标本的送运与处理 针筒送运法 无菌小瓶送运法 棉拭送运法 大量标本送运法 组织块送运法 厌氧袋送运法 分离和鉴定 检验的方法 1 直接镜检 一些特殊的特点，临床工作中的总结 可对初步判断及临床应用做早一步的 指 导作用 2 分离培养 1 初步培养 1 ）培养基的选择 强化血琼脂平板 卡那万古霉素冻溶血琼脂平板 七叶苷胆汁平板等等 2 ）标本的接种 每份标本应接种3个培养平板，分别放置于有氧，无氧和含5%~10%的CO2的容器中，有时需要专用的培养基  3） 厌氧培养法 a 厌氧罐培养法 b 气袋法 c 气体喷射法 d 厌氧手套箱法 e 其它等等 2 次代培养和厌氧菌的确定 3 分离培养中可能失败的原因 1）培养前为做标本的直接涂片和染色镜检 2）标本在空气中放置太久或接种时时间过长 3）未用新鲜配制的培养基 4）未用选择性培养基 5）无合适的厌氧罐或装备出现问题 6）培养时间不足 7）………………….. 鉴定实验 1 形态和染色 重要的是为下一步的鉴定提供参考， 时间 破伤风梭菌革兰氏染色改变 拉丝实验 加KOH30g/l一滴，能拉丝为阴性不能为阳性 PH 痤疮丙酸杆菌7.0时阴性及多型性 6.0及以下革兰氏阳性杆菌 2 菌落性状 1）色素 产黑色素类杆菌2~10天可产生黑色素；溶齿放线菌培养3~4天产生粉红色色素 2）溶血 产气夹膜梭菌在新鲜的血琼脂平板上可产生双溶血环 3）荧光 3 抗生素敏感实验 4一些特殊的敏感实验—— 聚茴香脑磺酸 钠敏感实验 5生化特性 6气液相色扑 7 PCR等等 有芽孢的厌氧菌 简介 梭菌属 G+ 陈旧性培养基G- 四 破伤风梭菌 大量存在于人和动物的肠道 粪便污染 伤口被污染导致----------注意消毒清洁 芽孢为于顶部，呈鼓槌壮，直径比菌体粗，呈梭状 可以被用来生物技术， 外毒素致毒 一）生物学性状 染色，培养 生化 对我们实验诊断来说最重要 破伤风梭菌菌体细长，长4～8um ，宽0.3～ 0.5um ，周身鞭毛，芽胞呈圆形，位于菌体顶端，直径比菌体宽大，似鼓槌状，是本菌形态上的特征。繁殖体为革兰氏阳性，带上芽胞的菌体易转为革兰氏阴性。破伤风梭菌为专性厌氧菌，最适生长温度为37℃pH7.0～7.5， 营养要求不高，在普通琼脂平板上培养24～48小时后，可形成直径1mm 以上不规则的菌落，中心紧密，周边疏松，似羽毛状菌落，易在培养基表面迁徒扩散。在血液琼脂平板上有明显溶血环，在疱肉培养基中培养，肉汤浑浊，肉渣部分被消化，微变黑，产生气体，生成甲基硫醇（有腐败臭味）及硫化氢。 一般不发酵糖类，能液化明胶，产生硫化氢，形成吲哚，不能还原硝酸盐为亚硝酸盐。对蛋白质有微弱消化作用。本菌繁殖体抵抗力与其他细菌相似，但芽胞抵抗力强大。在土壤中可存活数十年，能耐煮沸40～50分钟。对青霉素敏感，磺胺类有抑菌作用。 二）致病性与免疫性 破伤风梭菌芽胞广泛分布于自然界中可由伤口侵入人体，发芽繁殖而致病，但破伤风梭菌是厌氧菌，在一般伤口中不能生长，伤口的厌氧环境是破伤风梭菌