鲨肝肽基因在家蚕中的表达及其口服吸收的初步研究.docVIP

 鲨肝肽基因在家蚕中的表达及其口服吸收 的初步研究# 陈莹1,3，刘云龙1,3，刘阳1,3，吴梧桐2，吴祥甫1,3，张耀洲1,3，吕正兵1,3** 5 10 15 20 25 30 35 40 45 （1. 浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所，杭州 310018； 2. 中国药科大学生命科学与技术学院，南京 210009； 3. 浙江家蚕生物反应器和生物医药重点实验室，杭州 310018） 摘要：APSL（active peptide from shark liver）基因是从条纹斑竹鲨再生肝脏的 cDNA 文库中筛选获得的一条 cDNA 序列，早期的研究表明鲨肝活性肽 APSL 对损伤胰岛具有明显的 修复功能，可促进损伤胰岛的功能恢复。利用大肠杆菌表达系统表达 APSL 基因，纯化获得 重组蛋白免疫新西兰兔获得多克隆抗体。再利用 Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统构建含 APSL 基因的重组病毒 rBv-APSL，重组病毒在 BmN 细胞中扩增，经三代传代后，用 P4 重组病毒感 染家蚕幼虫，Western blotting 分析发现目的蛋白在家蚕幼虫中表达。制备了两种重组 APSL 蛋白的口服制剂，开展口服吸收研究，在口服重组 APSL 的小鼠血清经 ELISA 分析检测到重 组 APSL 的存在，说明小鼠口服重组 APSL 剂型可以被吸收进入血液，这为重组 APSL 口服制 剂的开发奠定了基础。从恢复胰岛功能的角度开展糖尿病的治疗是所有医药工作者期望，本 研究有可能会对其作出积极的贡献。 关键词：生物化学与分子生物学；鲨肝活性肽；真核表达；家蚕；Bac-to-Bac 杆状病毒表 达系统 中图分类号：Q78 Expression of active peptide from shark liver gene in silkworm, Bombyx mori L. and preliminary research on oral administration of the recombinant protein CHEN Ying1,3, LIU Yunlong1,3, LIU Yang1,3, WU Wutong2, WU Xiangfu1,3, ZHANG Yaozhou1,3, LV Zhengbing1,3 (1. Institute of Biochemistry, College of Life Science, Zhejiang Sci-Tech University, HangZhou 310018; 2. School of Life Science and Technology, China Pharmaceutical University, NanJing 210009; 3. Zhejiang Provincial Key Laboratory of Silkworm Bioreactor and Biomedicine, HangZhou 310018) Abstract: APSL (active peptide from shark liver) gene was obtained from the chiloscyllium plagiosum regenerated liver cDNA library. It was reported that APSL could repair damage in islet, and promote recovery of islet function. The APSL gene was expressed by E. coli prokaryotic expression system, and polyclonal antibody was obtained by purified recombinant protein after immunizing New Zealand rabbits. Then the recombinant virus rBv-APSL was constructed by using Bac-to-Bac baculovirus expression system. The recombinant virus was amplified and P4 recombinant virus was got after passaging through three generations. P4 virus infected silkworm larvae, and the expressed rAPSL was detected by Western blotting. Prepare two r