源于草鱼肠道抗菌肽的重组表达、分离纯化和抗菌活性分析.docVIP

 源于草鱼肠道抗菌肽的重组表达、分离纯化 和抗菌活性分析# 史玉婷，陶虚谷，孙科军，苏建明，陈韬** 5 10 （湖南农业大学，动物医学院，湖南长沙，410128） 摘要： 本研究根据草鱼肠道中分离得到的抗菌肽氨基酸测序结果，人工合成草鱼抗菌肽基 因，并将该合成基因克隆至 pET32a 载体中，构建成含有含 6×His 标签的重组质粒 pET-AP。 重组质粒转化至大肠杆菌 BL21 中，经 IPTG 诱导后，进行 SDS分析。测序结果表明， 插入片段的序列和位置均正确。通过 Ni2+-NTA 柱亲和层析纯化，用肠激酶将纯化的重组蛋 白中的 His 标签切除后回收重组抗菌肽，采用滤纸片方法测定其抗菌活性。结果表明重组抗 菌肽能明显抑制大肠杆菌的生长。 关键词：草抗菌肽；重组表达；纯化；抗菌活性 中图分类号：Q78 15 Expression, Prufication and Antimicrobial Analysis of Antimicrobial Pepetide Originated from intestine of Grass Carp SHI Yuting, TAO Xugu, SUN Kejun, SU Jianming, CHEN Tao 20 25 30 35 40 (College of Veterinary Medicine, Hunan Agricultural University, Changsha, Hunan 410128,China) Abstract: According to the amino acid sequence of intestine of grass carp, antimicrobial peptide (AP) coding genes were synthesized artificially and cloned into vector pET32a to construct a recombinant plasmid termed pET32AP which contains a 6×His tag. Plasmid pET-AP was transferred to Escherichia. coli strain BL21. SDSanalysis of recombinant protein was carried out after induced by IPTG. Sequencing results indicated that the sequence and location of insert fragment in pET-AP were correct. Recombination protein was purified by Ni2+-NTA column affinity chromatography. And enterokinase was used to recover the recombinant antimicrobial peptide (AP). Antimicrobial activity assay showed that recombinant AP could inhibit the growth of E. coli. Key words: Antimicrobial peptide; Recombinant expression; Purification; Antimicrobial activity 0 引言 抗菌肽是由生物细胞特定基因编码的一类具有强抗菌作用的小分子多肽，广泛存在于各 种生物体内，是动物和植物免疫防御系统产生的对抗外源性病原体的防御性肽类活性物质， 它们在机体天然免疫和获得性免疫中发挥着重要作用[1-5]。近年来，对于鱼类抗菌肽类物质 的研究进展较为迅速，已经从杂交斑纹鲈鱼(HybridStripedBass，Moronechrysops×Morone saxatilis)柱状细胞与鳃组织分别分离出抗菌肽Piscidin[6]及moronecidin[7]、鲆鲽类表皮粘液分 泌胞中分离到pleurocidin-like抗菌肽[8]、斜带石斑鱼(Epinepheluscoioides)白细胞cDNA文库扩 增得到抗菌肽epinecidin-1。抗菌肽在饲料加工业及养殖业中的应用不仅给人类带来绿色无公 害鱼肉禽类产品，同时其作为生物体天然产物，可以利用分子生物技术为基础、基因工程为 基金项目：湖南省教育厅优秀青年基金项目（08B036），教育部博士点新教师基金（20094320120005） 作者简介：史玉婷（1987-），女，湖南长沙人，硕士研究生 通信联系人：陈韬（1