利用家蚕杆状病毒表面展示技术制备间日疟原虫疫苗的研究.docVIP

 利用家蚕杆状病毒表面展示技术制备间日 疟原虫疫苗的研究 单茜茜1,2，张学赛1,2，陈剑清1,2，舒特俊1,2，张耀洲1,2** 5 10 15 （1. 浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所，杭州 310018； 2. 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室，杭州 310018） 摘要：间日疟原虫病毒 Tv159 株的裂殖子表面蛋白 4（PvMSP4）是一个由 230 个氨基酸残 基组成的膜蛋白，在 N 端有一个信号肽，C 端有一个糖基磷酸肌醇锚定区（GPI-anchor）， 中间含有两个重复序列和一个类表皮生长因子结构域(EGF-like Domain)。目前 MSPs 被认为 是疟疾疫苗的主要候选靶点。首先设计引物，构建重组质粒 pGEX-4T-1-PvMSP4，转化 E.coli Rosetta，诱导后成功表达，利用亲和层析的方法纯化重组蛋白，免疫新西兰雄兔制备多克隆 抗体，利用抗原亲和层析柱纯化抗体，间接 ELISA 测定其效价为 1:102400。同时利用 Bac-to-Bac 系统构建含 PvMSP4 基因的重组杆状病毒 Bmgp64PvMSP4，接种家蚕 BmN 细胞 和家蚕五龄幼虫，经 SDS和 Western blotting 分析，结果表明 PvMSP4 在家蚕细胞和 五龄幼虫中成功表达，进一步利用免疫荧光激光共聚焦显微镜观察发现蛋白在家蚕细胞中大 量表达。本课题为间日疟疫苗的研究奠定了基础。 关键词：生物化学与分子生物学; PvMSP4; 家蚕杆状病毒表达系统; 疟疾疫苗 中图分类号：Q78 20 Research on Baculovirus-Based Vaccine against Plasmodium vivax SHAN Qianqian1,2, ZHANG Xuesai1,2, CHEN Jianqing1,2, SHU Tejun1,2, ZHANG Yaozhou1,2 25 30 35 40 45 (1. Institute of Biochemistry, College of Life Science, Zhejiang Sci-Tech University, HangZhou 310018; 2. Zhejiang Province Key Laboratory of Silkworm Bioreactor and Biomedicine, HangZhou 310018) Abstract: Merozoite surface protein 4 (MSP4) of Plasmodium vivax Tv159 is a glycosylphosphatidylinositol-anchored integral membrane protein of 230 residues that possesses a signal peptide in N-terminus and two replication domain and a single epidermal growth factor (EGF)-like domain near the carboxyl terminus. Currently, MSPs are considered as the main candidate malaria vaccine target. First, designed primers , and constructed the recombinant plasmid pGEX-4T-1-PvMSP4, then transformed into E.coli Rosetta. After induction, the recombinant protein were successfully expressed. Then using GST affinity chromatography purified the ptotein. To obtain the polyclonal antibody, We immunized New Zealand male rabbit with the purified protein. Then purified the antibody by antigen affinity chromatography and measuring titer of 1:102400 by indirect ELISA. While using Bac-to-Bac system constructing recombinant virus Bmgp64PvMSP4, then inoculate BmN cells and s