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 APR3 多克隆抗体的制备和鉴定# 丁晓东1，张惠文2** 上海交通大学医学院附属新华医院，上海市儿科医学研究所，上海 200092 5 10 15 20 摘要：目的：针对小鼠凋亡相关蛋白 3 制备多克隆抗体。方法：合成针对小鼠 APR3 cDNA 文库对应翻译的氨基酸序列并加保护后藕联载体免疫 2 只新西兰纯种大白兔, 获取免疫血清 共 50ml， 经蛋白 A 柱 纯化及 抗原抗体亲和 纯化后, 采用 Western-blot 及免疫细胞化学 染色进行特异性鉴定。结果：构建了针对小鼠 APR3 cDNA 文库所对应两种序列所对应的抗 体，经检测证实其中一个抗体 Western blot 证明能特异性性识别小鼠组织及 NIH-3T3 细胞。 结论：成功制备了能特异性识别小鼠 APR3 的多克隆抗体。 关键词：凋亡相关蛋白 3；多克隆抗体；制备；鉴定 中图分类号：R257 Development and characterization of antibody to APR3 Ding Xiaodong, Zhang Huiwen (Xinhua Hospital affiliated to Shanghai Jiaotong University Medical School, Shanghai Institute for Pediatric Research, Shanghai 200092) Abstract: APR3 is a novel protein with unknown function. Good antibody is essential to its function study. Currently there is no commercial antibody against mouse APR3. To develop antibody against mouse APR3, we synthesized two peptides of APR3 to immune rabbit. The serums from immunized rabbits were further purified by affinity chromatography. The specificity was checked by Western Blot and immunity, which demonstrated a band at the predicted molecular weight. In conclusion, an antibody specific to mouse APR3 was developed. Key words: APR3; poluclonal antibody; development; characterization 25 0 引言 凋亡相关蛋白 3（apoptosis related protein 3，APR3）是基于 PCR 减法杂交技术从全反 式维甲酸（ATRA）诱导人 HL-60 细胞分化时得到的一个新基因。反向杂交检测认为其与 细胞凋亡相关，还可能与血细胞的发生与分化有关。另有研究发现 APR3 可将细胞周期阻 30 35 滞于 G1/S 期。其定位于 2 号染色体的短臂 23 区 3 带。在 Pubmed 数据库中小鼠 APR3 cDNA 文库有两个序列，分别为cDNAcloneMGC:61368IMAGE:5714599 和cDNAcloneMGC: 58396IMAGE:6585654 二者分别由 979bp 和 876bp，分别编码 223 和 162 个氨基酸，后者 羧基端的 155 个氨基酸与前者的羧基端完全一致，为便于讨论我们将较长者称之为 APR3L， 较短者称之为 APR3S。目前所有 APR3 的商品化试剂均为根据人的序列设计，对小鼠 APR3 的检测作用未知。为此我们设计了针对二者不同肽段的氨基酸序列制备对应的多克隆抗体， 从而为进一步研究 APR3 分子在体外及体内的生物学作用打下基础，现报告如下。 1 材料与方法 1.1 主要试剂 弗氏完全及不完全佐剂( sigma 公司),HRP 标记羊抗兔及兔抗羊(Beyotime 公司)；RIPA 基金项目：高等学校博士学科点专项科研基金资助课题（200802481048） 作者简介：丁晓东（1977-），男，主治医生，遗传代谢病 通信联系人：张惠文（1974-），女，副研究员，小儿内分泌遗传代谢病. E-mail: huiwenzhang@ -1-  40 45 50 55 60 65 70 75  （强）裂解液（Beyotime），BCA 蛋白浓度测定试剂盒、EC