Purα及其蛋白复合物参与DNA损伤修复的功能研究.docVIP

 Purα及其蛋白复合物参与 DNA 损伤修复 的功能研究 章小斌，吴怡，张风群，贾军祥，丁明，赵辅昆** 5 10 15 （浙江理工大学生命科学学院蛋白质组学与分子酶学研究室，杭州 310018） 摘要：Purα 是一种多功能蛋白，其参与 DNA 复制，基因转录以及细胞周期检验点调控等 多种途径。近年来，也有相关研究表明该蛋白还参与损伤修复过程，但具体作用机制并未清 楚。因此，为进一步探索 Purα 在 DNA 损伤修复过程中的生物学功能，本文运用免疫共 沉淀技术证明 Purα 与 Ku70/80 存在相互作用；双重免疫荧光标记及激光共聚焦显微镜技 术观察显示阿霉素作用会导致 Purα 入核，且与 Ku70/80 在细胞核内共定位， Purα 和 Ku70/80 两者的表达量也明显增强。结果提示 Purα 可能与 Ku70/80 联合参与由阿霉素引 起的损伤修复机制。 关键词：Purα； Ku70/80；相互作用；免疫细胞化学；阿霉素 中图分类号：Q513 The preliminary study about the function of Purα with its related protein complex involved in DNA damage repair Zhang Xiaobin, Wu Yi, Zhang Fengqun, Jia Junxiang, Ding Ming, Zhao Funkun 20  Abstract: (School of Life Science, Zhejiang Sci-Tech University, HangZhou 310018) Purα is a multifunction protein, which is a major player in the DNA replication, transcription and cell cycle. Recently, some reports showed that Purα may be involved in DNA repair, but the mechanism of its function is not clear. In this work, the co-immunoprecipitation experiment proved that Purα protein interacts with Ku70/80 proteins. The experiments of double 25 30 immunofluorescence labeling and confocal microscopy showed that with the using doxorubicin it is showed a phenomenon of the co-localization between Purα protein and Ku70/80 protein in the nucleus. What’s more, Purα is mainly located in the cytoplasm, after the treatment with doxorubicin, Purα translocated to the nucleus and the expression of Purα and Ku70/80 proteins were obviously higher. These results suggest a role for Purα is involved in the repair of DNA damage triggered by doxorubicin with Ku70/80 proteins. Key words: Purα; ku70/80; DNA damage; DNA repair; doxorubicin 0 引言 化学耐药性是癌症治疗中一个亟待解决的重要问题。研究表明，在抗癌药物作用下，细 35 40 胞内将产生大量的双链断裂，这将启动一种高效的 DNA 修复机制，促进基因组重排，导 致肿瘤细胞幸存从而引发细胞化学耐药性。因此，深入研究 DNA 修复机制对攻克癌症具有 重要的意义。 人类 PURA 基因定位在 5q31 染色体上，编码 322 个氨基酸，与鼠相差 2 个氨基酸， 进化中高度保守[1-4]。该基因编码的 Purα 蛋白是一个可与单链 DNA 或 RNA 高度亲和的 蛋白质，功能多样，参与调节 DNA 复制，转录，细胞周期调控和致癌性转化等。近年来， 有研究表明该蛋白还与损伤修复机制相关，White MK 等的研究表明 P