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 根癌农杆菌介导茶树转基因体系的建立 项威，贺志荣，魏书** （安徽农业大学茶与食品科技学院，合肥 230036） 5 10 15 20 25 30 35 40 摘要：利用农抗早茶树[Camellia sinensis(L.)O. Kuntze]品种的叶片进行培养，诱导形成 愈伤组织。选择生长旺盛、致密的愈伤组织块与菌株为 EHA105 的根癌农杆菌进行共培养， 通过潮霉素(Hygromycin)的抗性筛选，通过 GUS 染色及 PCR 的验证，证明试验获得部分转基 因愈伤组织，但是存在转化率较低的问题，存在这些问题的主要原因可能是在于，茶叶中多 酚类物质含量较高以及农杆菌致病基因在茶树中收到抑制。 关键词：茶树；组织培养；愈伤组织；根癌农杆菌 中图分类号：Q812 Establishion of Agrobacterium-Mediated Transformation into Camellia sinensis XIANG Wei, HE Zhirong, WEI Shu (College of tea food science and technology, Anhui Agricultural University, HeFei 230036) Abstract: An elite tea cultivar ‘Nong Men Kang’, was used in this experiment. Choose the callus piece were vigorous growth and burliness for agrobacterium-mediated by the EHA105. We Screening the transgenic callus by Hygromycin. The resistant callus were confirmed by PCR and GUS dyeing assay. Our study get some proof test transgenic callus, but conversion rate is very low. Lead to the cause of this problem is the content of polyphenols is very high in tea and the Vir gene is inhibited by polyphenols. Keywords: Camellia sinensis; tissue culture; callus cultures; Agrobacterium 0 引言 茶树(Camellia sinensis(L.)O. Kuntze)是多年生异花授粉植物，栽培历史悠久，是我国重 要的经济作物之一。茶叶中含有丰富的次生代谢产物，如多酚类化合物、儿茶素及咖啡碱等， 是中国人民的传统饮品，被誉为“国饮”，同时也是全球最受欢迎的无酒精饮料。 虽然茶树在经济效益及研究价值上拥有重要的地位，但是同时它在很多方面也存在较大 的局限性，如今，转基因技术的存在，很大程度上解决了一些难题。如常规茶树育种技术的 局限性，制约了优质资源的充分利用 ，使得茶树品种在选育时难以取得突破性进展[1]。转 基因技术则能够实现茶树的定向育种，缩短育种周期，获得性状优异的品种。再如，茶树存 在大量的此生代谢产物，但是在代谢途径及基因调控方面的研究却很匮乏，而在研究茶树次 生代谢流的调控时，就必须建立相关的转基因体。还有，茶树抗逆能力的改良：将抗病虫、 抗寒、抗旱等基因导入茶树中，提高茶树的抗性，利用转基因技术将抗病虫基因导入茶树， 可提高茶树抗病虫能力，获得抗病虫转基因新品种，有效降低茶叶的农残问题[2][3]。因此基 于茶树的研究来说，转基因技术具有非常重要的现实意义 。 目前在建立茶树转基因体系的方法，主要利用农杆菌转化技术及基因枪技术。自从发现 农杆菌具有转化能力的 30 多年来[4]，农杆菌介导转基因的方法一直是植物转基因中应用最 广泛的[5]。这个方法的成本较低、操作简单易行，可以有效的将目的基因整合到植物的基因 组中[6]。但是，这种方法的不足之处是遗传转化的效率并不高[7]。茶树基因转化虽有成功报 作者简介：项威，男，硕士研究生，主要研究植物分子生物学。 通信联系人：魏书，男，教授，博士生导师，主要研究植物分子生物学及植物次生代谢。 E-mail: weishu@ahau.edu.cn -1-  道，但仍不够成熟[8]。而茶树愈伤组织和悬浮细胞培养的基因转化则简单易行[9]。本实验利 用农杆菌对茶树愈伤组织转化进行了初步研究。 1 材料与方法 45 50  1.1 材料及药品 茶树品种