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姓 名： 陈佳佳 学 号： 3080402127 班 级： 生工081班 专 业： 生物工程 指导教师： 葛 飞 2011年12月29日 枯草芽孢杆菌通风发酵实验 一、实验目的 1.通过实验，了解通风搅拌的发酵过程 2.学习发酵过程各生理指标的测定 二、实验原料 氯化钠100g、葡萄糖150g、蛋白胨100g、酵母浸膏150g、水、枯草芽孢杆菌培养液、消泡剂 三、实验设备及仪器 30L通风搅拌发酵罐、pH计、分光光度计 四、实验原理 利用机械搅拌器的作用，使空气和发酵液充分混合促使氧在发酵液中溶解，以保证供给微生物生长繁殖、发酵所需要的氧气。 五、实验步骤 1.种子培养 将枯草芽孢杆菌接种在三角瓶内的培养基中，34℃下振荡培养24h。 2.管道灭菌 第一步：打开空气压缩机和蒸汽发生器； 第二步：关闭所有进入夹套、罐体阀门； 第三步：关闭空气管道，蒸汽管道通气，排掉管道内污水及冷凝水； 第四步：开启空气管道与蒸汽管道连接阀门，关闭空气管道进气阀门，进行空气管道灭菌若干时间； 第五步：灭菌结束后，关闭进蒸汽阀门，开启进空气阀门，排除管道内冷凝水。 3.空消 第一步：向罐体内加入水至15L左右； 第二步：关闭夹套冷凝水进水口，排出夹套内的水，向夹套通入蒸汽，同时打开搅拌器，直至温度升至100℃； 第三步：当温度升至100℃时，关闭夹套进蒸汽阀门，关闭搅拌器，以U字形从右至左、由远及近依次打开罐体进蒸汽阀门，直至温度升至121℃； 第四步：保持121—125℃半小时； 第五步：打开夹套内冷却水，冷却发酵罐，排出罐内水分，空消结束。 4.实消 第一步：配料后将料液加入到发酵罐内，并通入自来水至13L，实消结束变为15L； 第二步至第四步同空消的第二步至第四步； 第五步：打开夹套内冷却水，冷却发酵液，最终保持在34度左右，同时向罐内通入无菌空气，调节罐内压力0.1Mpa左右； 5.接种 第一步：待温度、空气流速及罐内压力调节结束后，准备接种； 第二步：接种环内棉花用酒精润湿，套入进料口，点燃，将枯草芽孢杆菌倒入发酵罐内； 第三步：打开搅拌器，进行搅拌； 6.培养以及记录数据 每隔3h取一次样品，并且测定其pH和生物量（OD值）。 六、实验数据记录 时 间 组 别 0 3 6 9 12 15 18 21 24 第五组 pH 6.02 5.51 4.83 5.00 5.66 5.97 7.45 7.75 7.83 OD值 0.281 0.580 1.478 1.929 2.107 0.913 0.841 0.857 0.899 注：部分OD值是稀释十倍以后得到的数值。 七、实验数据处理（以第五组为例）（图1、图2） 八、实验数据分析 由图1可见，pH值呈现先降后升的规律，pH值在6h达到最低点（4.97），此后pH值逐渐回升 由图2可见，0～3h为延迟期，2～18 h为对数期，18～24 h为稳定期，由于发酵24h，数据不够完整，衰亡期不能妄下评断。 其他数据有些偏颇，可能因为灭菌后罐体发酵液体积变大，灭菌不彻底，以及染菌等问题出现。 九、试验总结 1.本实验需要连续操作，每3h取一次样品，分别进行OD值与pH值的测定，并记录数据。 2.通过实验让我学会pH计以及分光光度计的使用操作。 3.读数存在误差，通过测量多组数据取平均值记录、列表。 通风发酵实验 ３