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限制性内切酶(EcoRⅠ)作用过程 DNA连接酶的作用过程 基因操作的基本步骤 1、提取目的基因 小 结 跟踪训练 科学家将β干扰素基因进行定点突变导入大肠杆菌表达,使干扰素第17位的半胱氨酸改变成丝氨酸,结果大大提高β干扰素的抗病性活性,并且提高了储存稳定性,该生物技术为( ) A.基因工程 B.蛋白质工程 C.基因突变 D.细胞工程 解析:基因工程是通过对基因的操作,将符合人们需要的目的基因导入适宜的生物体,原则上只能生产自然界已存在的蛋白质。蛋白质工程是指以蛋白质分子结构规律及其与生物功能的关系为基础,通过基因修饰或基因合成,对现有蛋白质进行改造,或制造出新的蛋白质,以满足人类的生产或生活需要。本题中合成的β干扰素不是天然的,因此,属于蛋白质工程。 答案 :B 热点聚焦 取出DNA 用限制酶切断DNA 不同的基因工程,所用的目的基因不同 (1)目的基因的概念:人们需要的特定基因。 高考总复习·生物 ① 概念:PCR全称为_______________,是在生物____复制___________的核酸合成技术 ③条件:_______________________、 _______________、___________ (做启动子)、 __________ 等 前提条件: 。 ②原理:__________ ④方式:以_____方式扩增,即____(n为扩增循环的次数) ⑤结果: 多聚酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 已知基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 一对引物 TaqDNA聚合酶 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 利用PCR技术扩增目的基因 双链的解开 ⑥过程: a、DNA变性(90℃-96℃): 双链DNA模板在热作用下,_____断裂,形成___________ b、退火(复性55℃-60℃): 系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部________。 c、延伸(70℃-75℃): 在Taq酶的作用下,从引物的5′端→3′端延伸,合成与模板互补的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 1、基因表达载体由________、________ ________、______四部分组成。 目的基因 启动子 标记基因 终止子 2、启动子作用: 3、标记基因的作用: RNA聚合酶识别和结合的位点 鉴别受体细胞中是否含有目的基因 筛选出含目的基因的细胞 2、目的基因与运载体结合 (1)用一定的_________切割质粒,使其出现一个切口,露出____________。 (2)用_______________切断目的基因,使其产生 ____________。 (3)将切下的目的基因片段插入质粒的______处,再加入适量___________,形成了一个重组DNA分子 (重组质粒) 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 相同的黏性末端 切口 DNA连接酶 重组质粒形成过程: 导入植物 细胞: 导入动物 细胞: 导入微生物细胞: 受体细胞 导入方法 体细胞 受精卵 受精卵 显微注射法 Ca2+处理法 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 高考总复习·生物 3、将目的基因导入受体细胞 导入方法: 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径 目的基因是否插入转基 因生物染色体的DNA: 目的基因是否表达: 目的基因是否转录: 方法: DNA分子杂交 方法: 分 子 杂 交 方法: 抗原抗体杂交 鉴定—— 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 检测— 4、目的基因的检测与鉴定 检测— 鉴定—— ①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 过程:A.首先取出转基因生物的基因组DNA B.用含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记, 以此做探针 C.使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带, 表明染色体已插入染色体DNA中 方法: DNA分子杂交 方法: 分 子 杂 交 方法: 抗原抗体杂交 过程:用上述探针和转基因生物的mRNA杂交,若出现杂 交带,表明目的基因转录出了Mrna. 基因工程的基本内容 基因操作 的基本步骤 基因操作 的工具 限制性内切酶 DNA连接酶 运载体 目的基因与运载体结合 目的基因的检测和表达 将目的基因导入受体细胞 目的基因的提取 高考总复习·生物 归纳整合 一、外显子与内含子 一般来说,结构基因都是由外显子和
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