儿童白血病融合基因分析-北京儿童医院.pptVIP

多重PCR检测结果：CBFB/MYH11融合基因 多重PCR检测结果：E2A/HLF融合基因 讨 论 本研究采用的多重巢式RT-PCR方法，可快速分析包括86种 mRNA剪接变异株的29 种染色体结构畸变。 我们分析了284例白血病标本，检出 149例患者携带16 种染色体结构畸变或基因异常，占总数的52.5%。 本方法可能使融合基因在患者初诊时成为临床白血病诊断的重要指标，而一旦确定该患者携带某种融合基因，即可以此为标志，帮助化疗和骨髓移植后微小残留病检测。 在本研究中，195例ALL患者中54例携带8种融合基因，占27.7%，72例AML患者中53例携带8种融合基因，占73.6%。因此，对于ALL来说，有必要结合以IgH/TCR基因重排为靶分子的微小残留病检测及流式细胞术MRD检测，以覆盖尽可能多的病例。 * 284例儿童白血病染色体结构畸变/基因异常 儿童白血病融合基因分析首都医科大学附属北京儿童医院 世界卫生组织（WHO）2000年白血病新分型认识到：白血病染色体结构畸变以及融合基因是白血病基本诊断的标准之一，了解患者的基因变异，可以对白血病临床治疗、预后判断提供帮助，同时还是白血病微小残留病（MRD）检测的基础。目前国际上已经开始针对白血病融合基因设计药物，如STI571。 迄今报道白血病涉及至少50多种典型的、类型特异的染色体易位，涉及大量的融合基因。PCR检测染色体结构畸变形成的融合基因是较为敏感和有效的方法。 在无法得知某病例确切的染色体易位之前，只能对该病例进行多次独立的PCR反应，浪费大量时间也未必获得确切结果，常规临床应用十分困难。 我们采用一种多重巢式RT-PCR方法，通过识别染色体结构畸变形成的融合基因，可同时筛选出29种急性白血病常见的染色体易位。 材料与方法 1 白血病样本  采自北京儿童医院2000年12月至2002年7月收治的儿童白血病284例，其中急性淋巴细胞白血病（ALL） 195例，杂合性白血病（HAL）1例，急性髓细胞性白血病（AML） 72例，慢性粒细胞性白血病（CML） 13例，慢性粒单细胞性白血病（CMML） 3例。 初诊病例271例，复发病例13例。男女比例173：111（1.56：1），年龄2月～16岁。所有病例均经临床、形态学、免疫学及组化染色确诊，部分例进行了染色体核型分析。 2 引物设计 来自已知常见的29种染色体易位: t(X;11), TAL1D, t(1;11), t(1;11), t(1;19), t(2;5), t(3;5), t(3;21), t(4;11), t(5;12), t(5;17), t(6;9), t(6;11), t(8;21), t(9;9), t(9;11), t(9;12), t(9;22), t(10;11), dupMLL, t(11;17), t(11;17), t(11;19), t(11;19), t(12;21), t(15;17) ,inv(16), t(16;21), t(17;19) 。 另有两种染色体易位，t(7;10)(q35;q24)和t(10;14)(q24;q11)不产生融合基因，而是导致位于10q24的HOX11原癌基因的活化。 3 实验步骤 3.1 细胞总RNA提取；3.2 特异性逆转录反应：采用32条逆转录引 物将RNA特异性逆转录为cDNA；3.3 多重巢式PCR反应：设立8组平行PCR 反应，分别使用第1～8组多重PCR引物；3.4 Split-out PCR反应；3.5 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染色 结 果 在284例白血病标本中，121例（42.6%）具有 15 种染色体结构畸变产生的融合基因，包括 SIL/TAL1、 MLL /AF1q、 E2A /PBX1、MLL/AF6、AML1/ETO、MLL/AF9、TEL/ABL、BCR/ABL、MLL/AF10、dupMLL、MLL/ENL、TEL/ AML1、PML / RARα、CBFβ/ MYH11、E2A/HLF等。 在195例ALL标本中，共有54例(27.7%)患者检出8种融合基因，包括SIL/TAL1, E2A/PBX1, MLL/AF6, BCR/ABL(e1a2型), MLL/AF10, dupMLL, MLL/ENL, TEL/AML1, E2A/HLF。 在72例AML标本中,共有53例（73.6%）患者检出8种染色体结构畸变产生的融合基因,包括MLL/AF1q, AML1/ETO，MLL/AF9, TEL/ABL, dupMLL, MLL/ENL, P