微生物学实验104P.ppt

微生物学实验;实验一显微镜油镜的使用和细菌形态的观察;目的要求;显微镜油镜使用的原理;普通光学显微镜Ⅰ;普通光学显微镜Ⅱ;实验程序Ⅰ〔显微镜的使用〕;实验程序Ⅱ〔显微镜的使用〕;实验程序III;实验程序Ⅲ;思考题;实验二细菌简单染色;一.实验目的和内容;二.实验材料和用具

;;四、本卷须知

载玻片要洁净无脂，否那么菌液涂不开。涂片时，滴水不要过多，挑菌量宜少，菌膜宜薄;实验三细菌的革兰氏染色法;一、目的要求;二、实验材料;三、根本原理;细菌先经碱性染料结晶紫染色，再经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌〔G+〕，后者为革兰氏阴性菌〔G-〕。;;革兰式阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差异，染色反响不一样。

一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度低，吸附染料差，易脱色，这是染色反响的主要依据。;另外，与细菌细胞壁的化学组成及结构有关。

革兰氏阳性细菌由于细胞壁肽聚糖含量高，脂类含量低，乙醇处理使细胞壁脱水，肽聚糖层孔径变小，通透性降低，结晶紫碘复合物被保存在细胞内，细胞不被脱色。;;再有阳性菌菌体等电点较阴性菌低，在相同pH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料较多，因此不易脱去，阴性菌那么相反。所以染色时的条件要严格控制。;四、方法与步骤;关键点：

严格掌握乙醇脱色程度，如脱色过度，那么阳性菌被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌被误染为阳性菌。

菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间很长，或已死亡及局部自行溶解了，都常呈阴性反响。;五、实验内容;大肠杆菌〔G-〕;枯草芽孢杆菌〔G+〕;金黄色葡萄球菌与大肠杆菌;六、实验思考题;实验四放线菌、霉菌形态的观察;一、实验材料;放线菌形态结构;放线菌的形态和大小;放线菌菌丝形态和功能;问题;放线菌的培养与观察方法;霉菌的形态结构观察;霉菌的营养体由分支或不分支的菌丝构???。许多菌丝相互交织形成菌丝体。

菌丝的大小：直径约为2～10μm，在光学显微镜下，菌丝细胞呈管状。;霉菌的菌丝;霉菌的繁殖方式和繁殖结构;根霉;毛霉;曲霉;青霉;霉菌的培养观察方法;二、实验内容与要求;实验报告;

实验七酵母菌的形态观察

;目的要求：

1、观察酵母菌的形态及出芽生殖，

2、学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。

;1、根本原理：

酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，大多数酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有性繁殖通过接合产生子囊孢子。

美蓝是一种无毒性的染料。它的氧化型呈蓝色，复原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的复原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的复原型。因此酵母活细胞是无色的，而死细胞或衰老细胞那么呈蓝色或淡蓝色，以此进行鉴别。;美蓝浸片的观察：

〔1〕在载玻片中央加一滴0.05%吕氏碱性美蓝染色液，用滴管取1滴酵母菌菌液于染液中，混合均匀。

〔2〕加盖玻片。注：不要产生气泡。

〔3〕将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母菌的形态和出芽情况，并根据颜色区别死、活细胞。;（4）染色约0.5h后再次进行观察，注意死细胞数量是否增加。

（5）绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征，并计算0.5h后酵母菌的死亡率。

;酵母菌;实验六培养基的配制与灭菌;3.实验方法和步骤;思考题;实验七微生物直接计数法〔血球计数板〕;计数板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四个槽构成三个平台，中央平台又由一短槽隔成两半，其上各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数室。

计数室刻度有2种：一种是25中格X16小格，而另一种为16中格X25小格，它们都是由400个小格组成。每个大方格边长为1mm，那么每个大方格面积为1X1=1mm2。盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间高度为0.1mm,所以每个计数室的体积为0.1X1X1=0.1mm3,每个大格有400个小格，所以每个小方格体积为0.1/400=1/4000mm3=1/4000,000ml。;*;三、材料与仪器：;四、方法与步骤:;4、位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方线及左方线上的菌体。

5、计数方法：

样品中菌数/ml=每小格平均菌数x4000,000x稀释倍数，本实验采用25x16规格，要求数