口腔免疫学详细版.pptVIP

一.流式细胞术(FCM) 利用流式细胞仪对处于快速流动的对象通过荧光标记进行多参数和快速的定量分析和分选的技术 对单列细胞或微生物颗粒的逐个检测 对细胞的识别和计数非常准确，检测的细胞数庞大 对细胞或颗粒的某些成分进行单细胞水平的定性定量分析 分选细胞：将具有特点形状或功能的细胞从混合细胞群中分离出来 等高图和密度图 用于：分子生物学；细胞生物学；免疫学 口腔应用：牙髓干细胞的初步鉴定 二.酶联免疫吸附试验(ELISA) 是目前应用最广泛的一项定性定量检测抗原或抗体的免疫酶技术 以免疫学反应为基础，使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持免疫活性 使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，即保持了抗原或抗体的免疫活性，也保留了酶的催化活性 ——高度特异性 结合在免疫复合物上的酶，当遇到相应的底物时，可催化底物发生反应生成显色的产物 ——高灵敏性 颜色的深浅又与相应的抗原或抗体的量成正比，可根据显色的深浅来对样本进行定性或定量分析——定性定量检测 口腔应用：龈沟液中细胞因子的检测 双抗体夹心法：检测抗原 间接法：测定抗体 三.免疫印迹技术 Western印迹法：检测蛋白质 蛋白质经单向电泳后分离，后被转移到硝酸纤维滤膜上，然后用放射性或酶标记的特异抗体来检测相应抗原的存在 口腔应用：基质金属蛋 白酶在OLP中的表达 四.免疫荧光 将免疫学方法与荧光标记技术结合起来研究特异性蛋白在细胞内分布的方法 利用荧光素所发出的荧光对抗原或抗体进行检测和细胞定位，并可利用定量技术测定含量 直接免疫荧光法：将荧光素标记在抗体上，使之与相应的抗原反应，在紫外光的照射下，用显微镜观察荧光现象；测定相应抗原 间接免疫荧光法：测抗原或抗体，引入标记二抗 口腔应用：天疱疮病损部位自身抗体的检测 IgA分为血清型和分泌型 血清型IgA :存在于血清中,由肠系膜淋巴组织中的浆细胞产生 分泌型IgA(SIgA) 呼吸道、消化道、泌尿生殖道等黏膜固有层中的浆细胞或外分泌腺(唾液腺、乳腺)的浆细胞分泌 存在于外分泌液中，如唾液、泪液、乳汁及呼吸道、消化道、泌尿生殖道黏膜表面的分泌液中 可存在于黏膜表面 是黏膜抗感染免疫的主要抗体 1.固有免疫： 固有免疫是牙周组织抵抗致病菌的重要屏障 固有免疫因子 固有免疫细胞(中性粒细胞、巨噬细胞、单核细胞) 中性粒细胞的作用 是结合上皮内和龈沟中的主要防御细胞 宿主抵御牙周菌斑微生物的第一道防线 在牙周炎症期，进入龈沟在补体和抗体的协同作用下吞噬细菌 直接杀菌功能：吞噬、溶解、凋亡、分泌抗菌物质（弹性蛋白酶） 间接保护功能： 促进龈沟微生态非致病菌的增殖 功能正常的中性粒细胞对牙周组织的健康及抗菌斑微生物屏障的完整具有重要意义 但中性粒细胞可通过合成并释放酶、前列腺素等生物活性物质破坏牙周组织结构，并导致牙周组织损伤 临床研究： 中性粒细胞功能受到抑制的患者常表现为早期重度牙周炎(青少年) 患有慢性中性粒细胞减少症、周期性粒细胞减少症的青少年常出现重度牙周炎 其功能轻度受损与牙周组织早期损伤有关 大多数局部侵袭性牙周炎患者，中性粒细胞和(或)单核细胞趋化功能减弱（参与趋化反应的数量及反应速度均降低） 巨噬细胞的作用 提呈抗原 吞噬并杀伤致病菌； 通过合成IL-1促进T细胞的增殖，并促进骨吸收 通过释放前列腺素调节宿主免疫反应 产生胶原酶、蛋白水解酶等引起牙周组织的破坏 2.适应性免疫 早期病损时牙周组织中出现T细胞和巨噬细胞；病变牙周组织的 TH/TS （反应机体免疫功能状态的指标）下降 确立期和晚期牙周病损处出现大量B细胞和浆细胞，B细胞的激活受控于T细胞的调节 牙周病损的进展与T细胞免疫调节失衡有关 T细胞对牙周破坏的重要机制是产生细胞因子 牙周病早期(临床牙龈炎期)，以Th1型反应(对抗细胞内细菌,细胞免疫)为主 IL-12，IFN-γ的产生能激活巨噬细胞，增强吞噬细胞的吞噬能力，起到免疫防御的作用 牙周病确立期及进展期以Th2型反应(对抗细胞外细菌,体液免疫)为主, IL-4、IL-10及IL-13大量合成 慢性牙周炎组织损伤与Th2型反应密切相关 牙周病的免疫发病机制特点： 宿主免疫反应既发挥防御保护的作用，同时也可通过细胞因子的作用造成牙周组织损伤 牙周病的发生发展主要是由宿主的免疫保护和免疫破坏机制不平衡所致 在急性炎症期，中性粒细胞具有保护作用，控制着龈沟内牙周微生态，随着牙周病菌的不断入侵，细胞因子产生导致牙周组织的破坏 在炎症确立期和晚期，牙周组织的破坏大于形成导致牙周组织的丧失 牙周病的免疫病理过程 初 期 菌斑积聚2～4天的边缘龈急性炎症 病损