大鼠BMP．7重组腺病毒构建及在肾小管上皮细胞中表达.PDF

第39卷第1期 浙江大学学报(医学版) Vol39No1 2010年 JOURNALOFZHEJIANGUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) 2010 http：∥www．journais．zju．edu．cn／med 大鼠BMP．7重组腺病毒构建及在 肾小管上皮细胞中表达 杨肃文1’2，王伟3，徐再春3，朱芸芸3 (1．浙江大学医学院附属邵逸夫医院检验科，浙江杭州310016； 2．浙江省生物治疗重点实验室，浙江杭州310016；3．浙江省立同德医院，浙江杭州310012) [摘要]目的：利用AdEasylMsystem构建携带大鼠BMP-7基因的重组腺病毒，并鉴定其在原代 肾小管上皮细胞中的表达。方法：将BMP-7全长序列分为46个片段分段合成，再采用PCR方法将 合成的46个寡核苷酸片段拼接成BMP-7基因，并克隆到测序载体中测序鉴定。经NotI和尉蒯Ⅲ -7在大鼠肾小管上皮细胞中的表达。RT—PCR方法检测仅一SMAmRNA的表达水平，以鉴定重组腺 病毒AdBMP-7的生物学活性。结果：构建了BMP-7基因的重组腺病毒载体，并制备出高滴度重组 腺病毒保存液。该重组腺病毒在体外能有效转染大鼠肾小管上皮细胞并高表达BMP-7蛋白，所表 达的BMP-7蛋白能有效逆转由TGF一81诱导的仅．SMA表达增高。结论：成功地构建了携带大鼠 BMP-7基因的重组腺病毒，并初步证实其具有一定的抗肾纤维化功能。 [关键词] 骨形态发生蛋白质类／遗传学；重组，遗传；转染；遗传载体；腺病毒科／遗传学；肾小 管／细胞学；上皮细胞／代谢；肾硬化症／治疗 [中图分类号]R692 【文献标志码] A [文章编号] of Constructionrecombinantadenovirus BMP-7andits containinggene in tubule cells expressionproximaIepithelial YANGSu—wen Wei Zai—chun RunRun 1’2，WANG3，XU 3，ZHUYun—yun3(1．ClinicalLaboratory，Sir Shaw 31001 AffiliatedHospital，CollegeofMedicine，ZhejiangUniversity，Hangzhou6，China；2．Key Laboratoryof 3 Provincial BiotherapyofZhejiangProvince，Hangzhou10016，China；3．ZhefiangTongde 3 Hospital，Hangzhou10012，China) constructarecombinantadenovirusvector bone [Abstract]Objective：To containingmorphogenic andto its activitiesin tubule ceHs protein-'／(BMP-7)geneidentifybiological proximal epithelial ofBMP-7wereobtainedPCRmethodandthenwere (PTECs)．Methods：Forty—sixfragments gene by tothe full ofBMP-7wassubclonedinto ligated