不同园艺植物花粉离体培养生活力的测定分析.ppt

花粉贮藏的原理在于创造一定的条件，使花粉降低代谢强度，延长花粉的寿命。花粉寿命的长短，因植物种类不同而异。在自然条件下，大多数植物的花粉从花药散出后只能存活几小时，几天或几个星期。 花粉寿命的长短除了上述因种遗传性的差异以外，还与温度、湿度有密切的关系。通常高温高湿下花粉呼吸旺盛，会很快失去生命力，但在极干燥的条件下，花粉失去水分，也不利于保存。 亚达姆斯试验发现苹果花粉在干燥状态下，可保存3个月；如放在2～8℃，湿度80％的条件下，经过5个星期即失去生活力。维霍夫试验中，丁香的花粉贮藏在干燥器中，15d以后发芽率降到50％；至20d时，仅有个别花粉发芽；到30d时，即全部死亡。 因此，暂时不用的花粉，应立即在适宜的条件下贮藏，妥善保存。为保持花粉生活力则人为采取减低其代谢强度，保持其纯洁性，将其贮存于低温、干燥、黑暗，并较为稳定的环境条件下，以保持其活力。 三、实验材料、主要仪器和试剂 1.材料：不同园艺植物，任选3种 2.主要仪器：镊子、显微镜、恒温箱、培养皿、烧杯、玻璃棒、量缸、电磁炉、标签、记号笔、离心管、冰箱、牙签、分析天平。 3.主要试剂：琼脂、蔗糖、硼酸、无水CaCl2 。 （一）形态检测法 ⑴ 把具有品种典型性的花粉粒作为具有生活力的花粉； ⑵ 把小的、皱缩的、畸形的以及没有内含物的作为没有生活力或具有较弱生活力的花粉。 花粉置于载玻片上，滴上水，盖上盖玻片观察，然后自制表格进行记载。 四、实验方法分别介绍 ? （1）采集花朵 选择正常的无病虫害的园艺植株上含苞待放正常的花朵，采集后带回实验室剔除过大及过小的以及一些叶子和杂质。 （二）花粉萌发检测法 （2）收集花药及散粉 用镊子取出花药（每个园艺植物取20个花蕾的花药）置于培养皿（纸盒-花粉量多）中，写上标签，进行必要的加温处理（培养箱温度25℃使其散粉。 （3）花粉的储藏 散粉然后将花粉收集于2ml的离心管（花粉瓶）中，用封口膜密封盖子，写上标签置于冰箱（-20℃）内储藏备用。（或者不同温度25℃，5℃、0℃、-20℃、-40℃和-86℃下贮藏）。注意采集花药开裂前后的新鲜花粉，对不成熟的幼嫩花药的花粉，成熟过头的花粉被雨露粘湿的花粉，有疑问的花粉杂质要除去。 （4）培养基的配制  培养基的配制： 琼脂量：7g/L， 蔗糖：15g/100mL（15%），调pH6.0，分装到培养皿中，凝固后即为花粉离体培养的发芽床。 花粉培养为固体培养，琼脂需要的量是5g/L-7g/L，在琼脂中分别添加蔗糖、硼酸、氯化钙为参照因素，按照（三因素三水平）进行正交设计。 按照设计进行配置培养基。 因素 水平 1 100 50 100 2 150 100 150 3 200 150 200 表1 因素水平表 试验处理 列号 1（A） 2（B） 3(C) 1 1 1 1 2 1 2 2 3 1 3 3 4 2 1 2 5 2 2 3 6 2 3 1 7 3 1 3 8 3 2 1 9 3 3 2 表2 花粉培养正交试验正交表 （5）撒播花粉 取出花粉，用牙签沾取已经散好的花粉轻轻均匀抖在培养基上，抖上之后先在显微镜下观察，要求每个视野内30～50个，避免成团影响观察效果。 按要求撒好后用记号笔在标签上做标记（时间、品种、组别）放在25℃培养箱内进行培养，观察花粉管的萌发伸长。 （6）观察 培养1h，2h，3h，5h后 进行显微镜观察,观察萌发的个数，每个培养皿观察3个重复，算出平均数，然后计算不同园艺植物不同贮藏条件下离体培养的花粉萌发率。 萌发率（%）=（已萌发的花粉粒数目/花粉粒总数）*100% （7）结果统计表1 材料1的花粉萌发率 贮藏温度 总数1 总数2 总数3 总数平均数 萌发1 萌发2 萌发3 萌发平均数 萌发率 常温 -20℃ （8）照片描述 桃的花粉萌发率的观察 桃的花粉萌发情况的观察 桃的花粉萌发情况的观察 杏梅的花粉萌发情况的观察 1.碘-?碘化钾染色测定法? 【原理】多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I2-KI溶液可将其?染成蓝色。发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。因此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。? （三）染色检测法 【器材与用具】???? 显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。???? 【试剂】? ?I2-KI溶液 实习三 不同园艺植物花粉 离体培养生活力的测定 一、实验目的 1.掌握园艺植物的花粉收集、并掌握利用不同方法进行花粉生活力的测定。 2.观察花粉在离体条件下的萌发