层状氢氧化氨基苯甲酸锌固定化辣根过氧化物酶和其催化性质.pdf

石 油 化 工 - 332 · PETR0CHEMICALTECHNoL0GY 2015年第44卷第3期 层状氢氧化氨基苯 甲酸锌固定化辣根过氧 化物酶及其催化性质 张 锋，王 辉，赵立芳 (宝鸡文理学院 化学化工学院 陕西省植物化学重点实验室，陕西 宝鸡 721013) [摘要]利用层状氢氧化氨基苯甲酸锌对辣根过氧化物酶(HRP)进行固定化实验，通过紫外分析探讨了固定化效果与HRP质量 浓度、体系pH的关系。利用Lineweaver-Burk双倒数做图法测定了固定化HRP的动力学常数，考察了固定化HRP的储存稳定性 和重复利用性。实验结果表明，在体系pH=8．0、HRP质量浓度为1．0mgm／L的条件下 ，层状氢氧化氨基苯甲酸锌对HRP的饱和 固载量为100mg／g，最大比活力为6O．27U／mg。固定化HRP的米氏常数(^rm)、催化常数( )、酶活性 )分别为3．23mmolL／， 42．5S～，57．5U／mg。与游离HRP相比，固定化HRP的 提高了44．2％， 下降了74．O％，X值下降了74．4％。储存40d后，固 定化HRP的活性为游离HRP的5．35倍。循环利用8次后，固定化HRP的活性保留率仍为79．6％。 [关键词]层状氢氧化氨基苯甲酸锌；酶催化；固定化 ；辣根过氧化物酶；动力学常数 [文章编号]1000—8144(2015)03．0332—07 [中图分类号]TQ033 [文献标志码]A ImmobilizationofHorseradishPeroxidaseonLayeredZincAminobenzoate HydroxideandItsCatalysis ZhangFeng，WangHui，ZhaoLfiang (ShaanxiKeyLaboratoryofPhytochemistry，DepartmentofChemistryandChemicalEngineering Ba0jiUniversityofA~sandSciences，Ba Shaanxi721013，China) lAbstractJTheimmobilizationofhorseradishperoxidase(HRP)onlayeredzincaminobenzoate hydroxidesupportwasconducted．TheeffectsoftheHRPmassconcentrationandpH on the immobilizationwereinvestigatedbymeansOfUV analysis．ThekineticsconstantsoftheHRP immobilizationweredeterminedbyLineweaver．Burk double．reciprocalplotmethod．Thestorage stabilityandreusabilityoftheimmobilizedHRPwerestudied．Theexperimentresultsshowedthatthe immobilizedHRPonlayeredzincaminobenzoatehydroxidewithamaximum immobilizationcapacity of100mg／gandspecificactivityof60．27U／mgcouldbepreparedundertheoptimalconditionsof pH8．0andHRPmassconcentration1．0mgm／L．Themichaelisconstant(K)，catalyticconstant(K~)【 andenzymeactivity )oftheimmobilizedHRPwere3．23mmol／L，42．5S～and57．5U／