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(2025年)PCR科室培训考核试题附答案

一、单选题（每题2分，共40分）

1.以下哪种物质可抑制PCR反应（）

A.水

B.甘油

C.肝素

D.氯化钠

答案：C。解析：肝素是一种强抗凝剂，它可以与DNA结合，抑制DNA聚合酶的活性，从而抑制PCR反应。而水是PCR反应的溶剂；甘油在一定浓度下可用于改善PCR反应的条件；氯化钠是维持反应体系离子强度的常用物质，一般不会抑制PCR反应。

2.PCR反应中，引物的设计原则不包括（）

A.引物长度一般为18-25个核苷酸

B.引物的GC含量应在40%-60%

C.引物3’端可以是A或T

D.引物自身不能形成二级结构

答案：C。解析：引物3’端应避免是A或T，因为A或T与模板的结合力较弱，可能导致引物错配，影响PCR反应的特异性。引物长度一般为18-25个核苷酸能保证合适的退火温度和特异性；GC含量在40%-60%有助于维持引物的稳定性和退火温度；引物自身不能形成二级结构，否则会影响引物与模板的结合。

3.实时荧光定量PCR技术中，SYBRGreenI荧光染料的作用是（）

A.特异性结合双链DNA

B.特异性结合单链DNA

C.特异性结合RNA

D.与Taq酶结合

答案：A。解析：SYBRGreenI是一种荧光染料，它能特异性地结合双链DNA，当它与双链DNA结合后，荧光信号增强，通过检测荧光信号的强度可以对PCR产物进行定量分析。它不特异性结合单链DNA、RNA，也不与Taq酶结合。

4.在PCR反应体系中，TaqDNA聚合酶的作用是（）

A.解开DNA双链

B.催化引物与模板的结合

C.催化dNTP合成DNA链

D.检测PCR产物

答案：C。解析：TaqDNA聚合酶具有5’-3’聚合酶活性，能以dNTP为原料，以DNA单链为模板，在引物的引导下催化合成新的DNA链。解开DNA双链是通过高温变性实现的；引物与模板的结合是在退火温度下自动进行的；检测PCR产物可以通过多种方法，如凝胶电泳、荧光定量等，不是TaqDNA聚合酶的作用。

5.以下哪种PCR技术可以用于检测基因的甲基化状态（）

A.RT-PCR

B.qPCR

C.MSP

D.RAPD

答案：C。解析：甲基化特异性PCR（MSP）是一种用于检测基因甲基化状态的技术，它通过设计针对甲基化和非甲基化DNA的特异性引物，对经过亚硫酸氢盐处理后的DNA进行PCR扩增，从而判断基因的甲基化情况。RT-PCR是逆转录PCR，用于将RNA逆转录为cDNA后进行PCR扩增；qPCR是实时荧光定量PCR，主要用于对PCR产物进行定量分析；RAPD是随机扩增多态性DNA，用于检测基因组的多态性。

6.PCR反应的基本步骤不包括（）

A.变性

B.退火

C.延伸

D.连接

答案：D。解析：PCR反应的基本步骤包括变性（高温使DNA双链解开）、退火（低温使引物与模板结合）、延伸（中温下TaqDNA聚合酶催化合成新的DNA链）。连接一般是指在基因工程中用DNA连接酶将DNA片段连接起来，不是PCR反应的基本步骤。

7.在实时荧光定量PCR中，Ct值的含义是（）

A.达到荧光阈值时的循环数

B.荧光信号的强度

C.PCR反应的终止循环数

D.模板DNA的浓度

答案：A。解析：Ct值即循环阈值，是指在实时荧光定量PCR过程中，荧光信号达到设定的荧光阈值时所对应的循环数。它与模板DNA的起始浓度呈负相关，可以通过Ct值对模板DNA进行定量分析。荧光信号的强度是检测到的荧光值；PCR反应一般不会有固定的终止循环数；模板DNA的浓度需要通过标准曲线等方法根据Ct值来计算。

8.以下关于PCR实验室分区的说法，错误的是（）

A.应分为试剂准备区、标本处理区、扩增区和产物分析区

B.各区域应独立，有明确的标识

C.扩增区和产物分析区可以合并

D.各区域的气流方向应从清洁区到污染区

答案：C。解析：PCR实验室的扩增区和产物分析区不能合并，因为扩增区是进行PCR扩增反应的区域，产物分析区是对扩增后的产物进行检测和分析的区域，扩增产物可能会造成污染，如果合并可能会导致污染扩散，影响实验结果。PCR实验室应分为试剂准备区、标本处理区、扩增区和产物分析区，各区域应独立且有明确标识，气流方向应从清洁区到污染区，以防止污染。

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