蜂蜜、蜂蜜制品及蜂蜜水中10种低聚糖含量的测定 高效液相色谱法.docxVIP

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蜂蜜、蜂蜜制品及蜂蜜水中10种低聚糖含量的测定高效液相色谱

法

1范围

本文件规定了蜂蜜、蜂蜜制品及蜂蜜水中蔗糖、松二糖、麦芽酮糖、麦芽糖、曲二糖、异麦芽糖、吡喃葡糖基蔗糖、松三糖、蜜三糖和麦芽三糖含量测定的高效液相色谱-蒸发光检测法。

本文件适用于蜂蜜、蜂蜜制品及蜂蜜水中蔗糖、松二糖、麦芽酮糖、麦芽糖、曲二糖、异麦芽糖、吡喃葡糖基蔗糖、松三糖、蜜三糖和麦芽三糖含量的测定。

2规范性引用文件

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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样用水溶解，乙腈定容后，过滤，液相色谱-蒸发光散射法测定，外标法定量。

5试剂和材料

除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

5.1试剂和标准品

5.1.1乙腈：色谱纯。

5.1.2三乙胺：优级纯。

5.1.3蔗糖、松二糖、麦芽酮糖、麦芽糖、曲二糖、异麦芽糖、吡喃葡糖基蔗糖、松三糖、蜜三糖和麦芽三糖标准物质：信息见附录A,纯度均≥98%。

5.2溶液

5.2.1乙腈+水溶液(40:60,v/v):准确量取40mL乙腈(5.1.1)置于100mL容量瓶中，用水定容，

摇匀。

5.2.2标准储备溶液：称取蔗糖、松二糖、麦芽酮糖、麦芽糖、曲二糖、异麦芽糖、吡喃葡糖基蔗糖、

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松三糖、蜜三糖和麦芽三糖标准物质(5.1.3)各0.2g(精确至0.1mg),分别置于10mL容量瓶中，加入6mL水溶解，用乙腈定容，摇匀，配置成各标准物质储备液，浓度为2g/100mL。该储备液储存在4℃条件下，有效期3个月。

5.2.3标准工作溶液：分别吸取蔗糖、松二糖、麦芽酮糖、麦芽糖、曲二糖、异麦芽糖、吡喃葡糖基蔗糖、松三糖、蜜三糖和麦芽三糖标准储备溶液(5.2.2)50μL、100μL、250μL、500μL、750μL至10mL容量瓶中，用乙腈+水溶液(5.2.1)稀释并定容，混匀，分别配制成0.01g/100mL、0.02g/100mL、0.05g/100mL、0.1g/100mL、0.15g/100mL浓度的10种糖混合标准工作溶液，用于绘制标准工作曲线。该工作溶液现用现配。

6仪器和材料

6.1高效液相色谱仪：配有蒸发光散射检测器。

6.2分析天平：感量0.01mg和0.001g。

6.3容量瓶：10mL,100mL。

6.4烧杯：100mL。

6.5有机相过滤膜：0.22μm。

6.6注射器：2.5mL。

7试样制备与保存

7.1试样的制备

对无结晶的蜂蜜或蜂蜜制品样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。分出200g作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做上标记。

对分储式蜂蜜水样品，将样品混匀，并做上标记。

7.2试样的保存

将试样于常温下保存。

8测定步骤

8.1样品前处理

对蜂蜜或蜂蜜制品，用天平(6.2)称取5g试样(精确至0.001g),置于100mL烧杯(6.4)中，加入30mL水，用玻璃棒搅拌使试样完全溶解，转移至100mL容量瓶(6.3)中，再用10mL水洗烧杯并转移至上述100mL容量瓶中，重复3次，然后用乙腈定容，混匀。用0.22μm滤膜(6.5)将样液过滤入样品瓶中，供高效液相色谱仪(6.1)测定。

对蜂蜜水样品，称取试样5g至于10mL容量瓶中，加入4mL乙腈，用去离子水定容，混匀。用

0.22μm滤膜(6.5)将样液过滤入样品瓶中，供高效液相色谱仪(6.1)测定。

8.2测定

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8.2.1液相色谱条件

a)色谱柱：Amide1.7μm150mm×2.1mmi.d,或相当者；

b)流动相：A,0.1%三乙胺-乙腈溶液；B,水。(梯度洗脱，见表1);

c)流速：0.25mL/min;

d)柱温：60℃;

e)漂移管温度：55℃;

f)气体压力：30psi。

g)喷雾器模式：加热，动力水平为60%;

h)进样量：3μL。

表1梯度洗脱条件

时间(min)

流速(mL/min)

A(%)

B(%)

初始

0.25

90

10

3

0.25

90

10

10

0.25

80

20

23

0.25

80

20

26

0.25

65

35