W免疫学常用实验方法.pptVIP

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2025-11-28 发布于北京
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W免疫学常用实验方法.ppt

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（优选）W免疫学常用实验方法;;CDR1;AntigenicDeterminant;Specificity特异性;Reversibility可逆性;Ratio最适比例;Sensitivity敏感性;ELISA------酶联免疫吸附试验;1.ELISA(酶联免疫吸附试验EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay);Lequin,R.M.ClinChem2005;51:2415-2418;基础:抗原或抗体的固相化

抗原或抗体的酶标记

;a.包被

b.抗原抗体反应

c.酶促反应,显色

d.终止显色，读取数据。

;不同类型的检测方法;第15页，共56页。;2.Immunohistochemistry(免疫组化);Zhao,X.etal.

CancerRes2007;67:4443-4450;成败的关键因素：

组织的固定、包埋

抗体（特异性、浓度、孵育温度和时间）

非特异性抗原的封闭

内源性酶或自发荧光的消减

显色;;测量对象;细胞表型分析

胞内细胞因子的检测

细胞周期和DNA倍体分析

细胞分选

;（1）多参数定量分析每一个细胞；

（2）细胞分选；

高纯度：99%以上；

可分析小于1/10000比例的稀有细胞群、

单细胞克隆等。

(3）高通量（分析分选）．

分析150，000个/秒

分选100，000个/秒

;基本结构;工作原理;;;c.细胞分选;外周全血细胞散射光双参数点图

（红细胞溶解后）;直方图分析;点状图分析;设门分析;实验对照的设计;4.WesternBlott;5.HybridomaTechniqueMonoclonalAntibodyPreparation;;;第37页，共56页。;PreparingmAbsfrommurineascites;II.Assayforcellfunction;CellProliferationStimulators;AssayforTcellproliferation;b.MTT;c.CFSE;AssayforTcellcytotoxicity;Isolationofstemcells;Indentificationofstemcells;Cultureofisolatedstemcells;DifferentiationofStemCells;III.Animalexperiment;SCID：Severecombinedimmunedeficiency

严重联合免疫缺陷小鼠

T、B淋巴细胞功能均缺失;Transgenicmice:GFP-transgenicmice;Generationoftransgenicmice;;

;第55页，共56页。;谢谢大家！