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发酵工程制药技术

发酵菌种：发酵工业微生物菌种的制备

1.?菌种的分离筛选

1)?工业微生物获得途径

①向菌种保藏机构索取有关的菌株，从中筛选所需菌株。

②由自然界采集样品，从中进行分离筛选。

③从一些发酵制品中分离目的菌株。

2)?从自然界分离筛选微生物的方法

①含微生物样品的采集：一般土壤采集，注意有机质含量、通气情况、酸碱度情况等。

②含微生物样品的富集培养：控制培养基营养成分；控制培养条件；抑制不需要的菌类。

③微生物的分离：稀释涂布和划线分离法；利用平皿中生化反应（透明圈、变色圈、生长圈、抑菌圈）；组织分离法；通过控制营养和培养条件分离。

④野生型目的菌株的筛选：初筛、复筛。

⑤野生型目的菌株的菌种鉴定。

2.?菌种培育

菌种的培育即菌种的适应性进化，又称菌种驯化，一般指通过人工措施使微生物逐步适应某一条件，而定向选育微生物的方法。

结果：获得较高耐受力及活动能力的菌株。

3.?菌种的保藏

在广泛收集实验室和生产菌种的基础上，将其妥善保藏，使之达到不死、不衰、不污染，以便于研究、交换和使用的目的。

菌种保藏的原理：

①挑选典型菌种的优良纯种，采用其休眠体。

②创造适合其长期休眠的环境条件。

菌种保藏的方法：

①斜面低温保藏法：将微生物在适宜的斜面培养基和温度条件下培养并生长良好后，放入4-5℃冰箱中保藏。

②液体石蜡油保藏法：斜面保藏的一种方式，斜面中加入石蜡油，可防止培养基水分蒸发并隔绝氧气。

③砂土管保藏法：砂和土的比例一般为3：2或1：1?将要保存的菌种斜面孢子刮下，直接与砂土混合或制成悬浮液，放在干燥低温环境下保存。

④冷冻干燥保藏法：?将菌种制成悬浮液，与保护剂(一般为脱脂牛奶或血清等)混合，用低温酒精或干冰(－15℃以下)速冻，用真空泵抽干，最后真空密封，低温保存。

⑤液氮超低温保藏法：菌种加10％保护剂（甘油、二甲基亚砜），以1℃/min速度降温到-35℃，置于液氮气相中（-196℃）保藏。

4.?退化菌种的复壮

菌种退化：生产菌种或选育过程中筛选出来的较优良菌株，由于进行移接传代或保藏之后，群体中某些生理特征和形态特征逐渐减退或完全丧失的现象。

表现：生长速度变慢、目的代谢产物合成变慢。

原因：菌种遗传特性改变：菌种生理特性改变。

防止菌种退化的方法：

①尽量减少传代。

②经常对菌种进行纯化。

③创造良好的培养条件。

④用单核细胞移植传代。

⑤采用有效的菌种保藏方法。

菌种的复壮：指对已衰退的菌种进行纯种分离和选择性培养，使其中未衰退的个体获得大量繁殖，重新成为纯种群体的措施。

菌种复壮的方法：

①纯种分离。

②淘汰已衰退的个体。

③宿主体内复壮法（寄生性微生物）。