免疫学诊断课件.pptVIP

正向間接血凝反向間接血凝4.間接凝集抑制反應（檢測標本中是否存在與致敏Ag相同的Ag）（三）中和試驗（病毒、毒素中和試驗）原理：病毒與抗血清中抗體特異結合後失去感染易感動物、雞或鴨胚、細胞活性例1-NDV9～11d雞胚24～48h雞胚死亡-NDV+抗血清9～11d雞胚雞胚不死亡例2口蹄疫病毒(FMDV)4～7d乳鼠乳鼠死亡FMDV+抗血清4～7d乳鼠乳鼠不死亡例3FMDV仔豬腎傳代細胞(IB-RS-2)單層細胞細胞病變(CPU)：變圓、成串、空泡、變形、脫落、裂解FMDV+抗血清IB-RS-2單層細胞細胞無病變CPU????免疫學診斷技術包括 體液免疫檢測技術——血清學技術細胞免疫檢測技術第一節體液免疫檢測技術

——血清學試驗(抗原抗體試驗)種類：1．沉澱試驗2．凝集試驗3．補體參與的試驗傳統試驗4．中和試驗5．標記抗體試驗——新技術一．體外抗原抗體反應的一般規律1．高度特異性異嗜性抗原與免疫血清之間交叉性腸道桿菌與免疫血清之間解決辦法：將動物免疫血清中的多克隆抗體通過吸收試驗，製成單因數血清應用雜交瘤技術製備單克隆抗體2．反應可逆性PH7.0T370CAg+血清(Ab)Ag-Ab複合物PH＜3T＞600C利用抗原抗體特異性結合反應的可逆性規律，建立親和層析技術，純化免疫純的抗原或抗體親和層析技術提取免疫純抗體示意圖3．反應二階段性第一階段反應——形成Ag-Ab複合物第二階段反應——出現可觀察的現象4.濃度和比例一定濃度範圍，一定電介質存在下，二者比例適當二．抗原抗體反應結果受多因素影響（1）免疫血清品質要好注意：-空腹采血-防止細菌污染——用具滅菌，無菌操作-防止溶血——用具滅菌後乾燥，防止酒精與血接觸-保存好血清——加適量防腐劑，2-80C保存（2）電解質稀釋抗原、血清常用0.85%NaCl溶液（生理鹽水），但稀釋禽類血清用6%～8%鹽水更好。作用：降低抗原抗體的電勢，完成二步反應（3）溫度：40C～560C均可溫度低反應慢，溫度高反應快。最常用370C30min（4）PH值稀釋抗原、血清的溶液PH6.0～8.0均可以，最常用PH7.0～7.2通常抗原抗體蛋白的等電點都在PH6以下，若抗原或抗體溶液PH接近等電點，自身就會凝聚，出現非特異性的凝集或沉澱反應為了穩定PH，故在抗原抗體反應中最好用PH7.0～7.2的磷酸緩衝液（PBS）作抗原抗體稀釋液※因為抗原抗體反應結果受多因素影響，為了證實試驗的準確性，故在試驗中一定要設立陽性、陰性和空白對照三．各類抗原抗體反應簡介（一）沉澱試驗0.85%NaCl可溶性抗原+免疫血清出現沉澱現象(血清蛋白、病毒)（抗體）比例適合沉澱原沉澱素比例不適合不出現沉澱現象容易過多前帶現象（稀釋）比例不適合——不能完成第二步反應——帶現象1．環狀沉澱試驗原理：小試管內，下層沉澱素與上層沉澱原在介面應形成白色沉澱環