免疫学检测技术的基本原理课件.pptVIP

免疫印跡法(Immunoblotting)是將凝膠電泳與固相免疫測定結合，先把電泳分區的蛋白質轉移到固相載體，再用酶免疫、放射免疫等技術測定。該法能分離分子大小不同的蛋白質並確定其分子量。常用於檢測多種病毒如HIV的抗體或抗原。免疫印跡法示意圖第二節淋巴細胞的測定檢測各群體淋巴細胞的數量與功能是觀察機體免疫狀態的重要手段。外周血是病人主要的檢測標本，但僅代表再迴圈的淋巴細胞。實驗動物還可取胸腺、脾、淋巴結等作為標本進行檢查。免疫學檢測技術的

基本原理提要利用免疫學原理建立的免疫學檢測技術主要應用於對多種免疫性疾病（感染性疾病、免疫缺陷病、超敏反應、自身免疫病、免疫增殖病、移植排斥反應和腫瘤等）的診斷、療效評估、發病機制探討、以及對抗原性物質或免疫細胞的定性、定量，對細胞因數、粘附分子及細胞受體的檢測等。第一節抗原或抗體的檢測抗原-抗體反應包括沉澱反應、凝集反應、溶解反應、補體結合反應和中和反應等。抗原-抗體反應可用已知的特異性抗體檢測未知的抗原；也可用已知的抗原檢測未知的抗體。免疫螢光技術、免疫酶技術、同位素標記技術、發光免疫分析等免疫標記技術提高了抗原抗體反應的敏感性。抗原-抗體反應的特點?抗原-抗體的結合是特異性結合?抗原抗體結合是分子表面的非共價鍵結合?抗原抗體反應可分為兩個階段特異性結合階段可見的反應階段?抗原和抗體結合是否呈現可見的反應現象，於兩者的分子比例密切相關抗原抗體比例對反應現象的影響抗原-抗體反應受多種因素影響1電解質：抗原-抗體反應通常應用0.85%的氯化鈉作為稀釋液，以供給適應濃度的電解質。2溫度：一般常使用反應在37度水浴或孵育箱中進行。3.酸鹼度：抗原-抗體反應適應的酸鹼度為PH6~8。抗原抗體的檢測方法凝集反應沉澱反應補體溶血反應和補體結合反應中和反應用標記抗體或抗原進行的抗原抗體反應凝集反應

(Agglutination)細菌、紅細胞等顆粒性抗原與相應抗體結合後形成凝集現象，稱為凝聚反應。1、直接凝集：將細菌或紅細胞與相應的抗體直接反應，出現細菌凝集或紅細胞凝集現象。又分為玻片法和試管法。2、間接凝集：將可溶性抗原包被在紅細胞或乳膠顆粒表面，與相應抗體反應出現顆粒凝集現象。血球凝集

沉澱反應

（Precipitation)血清蛋白質、細胞裂解液或組織浸液等可溶性抗原與相應抗體結合後出現沉澱物，這一類反應稱為沉澱反應。沉澱反應可在液體中進行，如絮狀沉澱。大多沉澱反應是用半固體瓊脂凝膠為介質，進行瓊脂擴散故也稱免疫擴散。單向免疫擴散

(SingleImmunodiffusion)是將一定量已知抗體混於瓊脂凝膠中制瓊脂板，在適當位置打孔後將抗原加入孔中擴散。抗原在擴散過程中與凝膠中的抗體相遇，形成以抗原孔為中心的沉澱環，環的直徑與抗原含量成正比相關。本法常用於測定血清IgG、IgM、IgA和C3等的含量。含抗體的凝膠沉澱環雙向免疫擴散

（DoubleImmunodiffusion)是將抗原與抗體分別加入瓊脂凝膠的小孔中，二者自由向周圍擴散並相遇，在比例合適處形成沉澱線。如果反應體系中含兩種以上的抗原抗體系統，則小孔間可出現兩條以上的沉澱線。本法常用於抗原或抗體的定性、組成和兩種抗原相關性分析的檢測。免疫電泳

（Immunoelectrophoresis)是先將待側血清標本作瓊脂凝膠電泳，血清中各蛋白組分被分成不同的區帶，然後與電泳方向平行挖一小槽，加入相應的抗血清，把分成區帶的蛋白抗原成分作雙向免疫擴散，在各區帶相應的位置形成沉澱弧。該法常用於血清蛋白種類分析，以觀察Ig的異常增多或缺失。火箭電泳（RocketElectrophoresis)火箭電泳也稱免疫擴散，是把單向免疫擴散同電泳結合在一起的方法。抗原在含有定量抗體的瓊脂中泳動，兩者比例適宜時，在較短時間內生成錐形的沉澱峰。在一定濃度範圍內，沉澱峰的高度與抗原含量成正比。此法的特點是需時較短，故可用於快速沉澱標本中抗原的含量。火箭電泳示意圖補體結合反應（ComplementFixation,CFT)敏感性和特異性均較高，但該試驗影響因素較多，現在已有被其他新方法取代的趨勢。免疫標記技術用螢光素、同位素或酶等示蹤物質標記抗體（或抗原）進行抗原-抗體反應。標記物質與抗體（或抗原）的化學連接未改變抗體（或抗原）的免疫學