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羊毛囊干细胞转录组测序与分析研究

目录

文档概括．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.1.1羊毛产业发展现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

1.1.2干细胞研究的前沿进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

1.1.3转录组测序技术在．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11

1.2国内外研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

1.2.1羊毛囊干细胞分离与培养技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

1.2.2羊毛囊干细胞生物学特性研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

1.2.3羊毛囊干细胞转录组测序研究进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

1.3研究目的与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

1.3.1本研究的主要目标．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

1.3.2本研究的主要内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

1.4技术路线与研究方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

1.4.1实验材料与试剂．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

1.4.2羊毛囊干细胞的分离与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34

1.4.3总RNA的提取与质量控制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36

1.4.4高通量转录组测序．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38

1.4.5转录组数据分析策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41

1.5论文结构安排．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41

材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41

2.1实验动物与样品采集．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45

2.1.1实验动物的选择与饲养．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．47

2.1.2羊毛组织的采集方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．49

2.2羊毛囊干细胞的分离与培养．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．51

2.2.1羊毛囊组织的酶解消化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．53

2.2.2单细胞悬液的制备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．55

2.2.3羊毛囊干细胞的贴壁培养．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．56

2.2.4羊毛囊干细胞的传代培养．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．58

2.3总RNA的提取与质量检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．59

2.3.1总RNA的提取方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．62

2.3.2RNA质量控制与检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．65

2.4高通量转录组测序．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．68

2.4.1测序文库的构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．70

2.4.2mRNA测序数据的生物信息学分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．71

2.5转录组数据分析方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．75

2.5.1数据预处理与过滤．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．77

2.5.2基因表达量计算与标准化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．80

2.5.3差异表达基因的筛选．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．81

2.5.4功