高级动物生物化学蛋白质的分离纯化.pptVIP

离子交换基团的结构和性质类型名称结构式性质DEAE二乙基氨基乙基(diethylaminoethyl)-O-CH2-CH2-N+-(C2H5)2弱碱性QAE季胺乙基(quaternaryaminoethyl)-O-CH2-CH2-N+-(C2H5)3强碱性Q季胺(quaternaryamine)-CH2-N+-(CH3)3强碱性CM羧甲基(carboxymehyl)-O-CH2-COO-弱酸性SE磺乙基(sulfoethyl)-O-CH2CH2-SO3-强酸性SP磺丙基(sulfopropyl)-O-CH2-CH2-CH2-SO3-强酸性P磷酸基(phosphate)-O-PO3-中酸性S磺酸基(sulfonate)-CH2-SO3-强酸性第29页，共63页，星期日，2025年，2月5日可用来作为交换剂支持物的物质种类较多。早期用于分离氨基酸、小肽和其它小分子物质的离子交换树脂的支持物是聚苯乙烯类。分离蛋白质的常用的亲水性支持物。有三大类：纤维素、葡聚糖凝胶(sephadex)、琼脂糖凝胶(sepharose)和合成凝胶(Trisacryl和Fractogel)。1、离子交换纤维素离子交换纤维素是以纤维素做支持介质的。具有松散的亲水性网络，较大的表面积，吸附容量大，通透性好。根据离子交换纤维素所含离子交换基团的性质可分为强酸、强碱型和弱酸、弱碱型。现将常用的离子交换纤维素列于下表中。第30页，共63页，星期日，2025年，2月5日常用的离子交换纤维素离子类型解离基团特点DEAE-—O—CH2—CH2—N+(C2H5)—在pH8.6应用第31页，共63页，星期日，2025年，2月5日阴离子解离基团交换摩尔(mmol/g)特点DEAE—O—CH2—CH2—N(C2H5)0.1～1.1在pH8.6应用AE——O—CH2—CH2NH20.3～1.0??TEAE—O—CH2—CH2—N(C2H5)30.5～1.0碱性较强?GE—?0.2～0.5?强碱性在极高的pH仍可应用PAB—0.2～0.5??ECTEOLA三乙醇胺通过甘油基和多聚甘油基链连接到纤维素上，混合基团0.1～0.5弱碱性适于分离核酸常用的离子交换纤维素第32页，共63页，星期日，2025年，2月5日阳离子解离基团交换摩尔(mmol/g)特性CM——O—CH2—COOH0.5～1.0弱酸，在pH4应用P——O—PO3H20.7～7.4酸性较强SE——O—CH2—CH2—SO3H0.2～0.3强酸性第33页，共63页，星期日，2025年，2月5日在Sephadex上接上某种离子交换基团。这种凝胶既有离子交换剂的性质，又有分子筛效应。因此，其分离能力比单纯的层析凝胶或离子交换剂好。葡聚糖凝胶离子交换剂的交换量比相应的纤维素离子交换剂大，如DEAE—Sephadex的交换量大约是DEAE—纤维素的3.5～5.0倍。2、离子交换葡聚糖凝胶（Sephadex）第34页，共63页，星期日，2025年，2月5日葡聚糖凝胶离子交换剂的性质类别离子交换基团床体积ml/g分离范围(Mr)交换量总交换容量(mmol/g)强阳离子交换剂SE—SephadexC—25C—50-CH2CH2SO3H5～932～383×104-2×1053×104-2×1052.0～2-52.0～2-5SP—SephadexC—25C—50-CH2CH2CH2SO3H2.3±0.3弱阳离子交换剂CM—SephadexC—25C—50-O-CH2COOH6～1032～403×104-2×1053×104-2×1054.5±0.5第35页，共63页，星期日，2025年，2月5日强阴离子交换剂QAE—SephadexA—25A—505～830～403×104-2×1053×104-2×1053.0×4.0弱阴离子交换剂DEA