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肿瘤病理诊断手段介绍
CATALOGUE
目录
01
样本采集与处理
02
常规组织学技术
03
免疫组化诊断
04
分子病理技术
05
细胞病理学手段
06
诊断整合与质控
01
样本采集与处理
手术标本取材规范
标准化取材流程
手术标本需由病理医师在无菌条件下按解剖学定位标记,确保取材区域覆盖肿瘤中心、边缘及周围正常组织,避免挤压或干燥导致人为假象。
组织固定要求
立即置于10%中性缓冲福尔马林中固定6-48小时,固定液体积需为标本体积的10倍以上,以保证组织形态学完整性,避免自溶或过度固定影响后续分子检测。
多学科协作记录
联合外科、影像科标注肿瘤大小、浸润深度及与切缘距离,对特殊病例(如乳腺癌前哨淋巴结)需单独分装并标记,确保病理分期准确性。
活检标本处理流程
冰冻切片适应症
仅适用于术中快速诊断,需在-20℃恒温冷冻机中速冻,避免冰晶形成,且剩余组织需常规固定以备后续免疫组化或基因检测。
定向包埋技术
黏膜活检需垂直包埋以观察全层结构,骨穿标本需脱钙处理(EDTA或甲酸脱钙液)48-72小时,避免脱钙过度破坏抗原表位。
内镜/穿刺标本快速处理
微小组织需用滤纸包裹防止丢失,内镜活检标本应区分不同部位(如胃癌的窦部与贲门部),穿刺标本需记录穿刺针号及进针次数以评估代表性。
细胞学标本制备方法
02
03
快速现场评估(ROSE)
01
液基细胞学技术(LBC)
联合介入科在CT引导穿刺时即时染色(Diff-Quik法),评估标本adequacy,减少二次穿刺率,尤其适用于肺小结节或胰腺占位病变。
细胞块制作
富细胞标本(如胸腹水)需经甲醛固定后离心沉淀,琼脂包埋形成细胞块,可进行HE染色、免疫细胞化学及FISH检测,弥补涂片结构缺失的局限。
宫颈或浆膜腔积液标本需采用ThinPrep或SurePath液基保存液,通过离心滤膜技术去除血液和黏液,制成单层细胞涂片,提高异型细胞检出率。
02
常规组织学技术
石蜡包埋切片制作
组织固定与脱水处理
采用10%中性缓冲福尔马林固定组织样本,随后通过梯度乙醇(70%-100%)脱水,确保细胞结构完整性和后续石蜡渗透效果。
透明化与浸蜡过程
使用二甲苯作为透明剂替代组织内水分,再以56-58℃熔点的石蜡浸渍,形成均匀包埋块以支持超薄切片(3-5μm)制备。
切片机操作与展片
采用旋转式切片机进行连续切片,通过温水浴展平后贴附于载玻片,60℃烘烤1小时增强组织粘附性,避免脱片风险。
常规染色(HE)应用
苏木精(Hematoxylin)与细胞核内DNA结合显蓝色,伊红(Eosin)与胞质蛋白结合显粉红色,形成高对比度组织结构图像。
苏木精-伊红染色原理
包括脱蜡、水化、染色、分化、返蓝及脱水封片等步骤,全程需严格控制时间(如苏木精染色5-10分钟)以保证染色一致性。
标准化染色流程
HE染色可清晰显示肿瘤细胞异型性、核分裂象及间质浸润情况,是鉴别良恶性肿瘤的首选方法。
病理诊断基础作用
特殊染色技术选择
结缔组织染色(如Masson三色)
用于区分胶原纤维(蓝色)、肌纤维(红色)及纤维素(深红色),辅助诊断纤维化病变或肉瘤类型。
糖原与黏液染色(PAS/AB-PAS)
过碘酸雪夫(PAS)染色检测糖原沉积,阿尔辛蓝(AB)染色显示酸性黏液,联合应用可鉴别腺癌亚型。
微生物检测染色(抗酸染色)
针对结核分枝杆菌等病原体,采用Ziehl-Neelsen法使菌体呈红色,背景为蓝色,提升感染性病变检出率。
03
免疫组化诊断
特异性与敏感性平衡
抗体筛选需基于大量临床样本验证其诊断价值,例如CD20用于B细胞淋巴瘤诊断时需确认其与病理分型的匹配度,并参考国际共识指南(如CAP/ASCO推荐抗体面板)。
临床相关性验证
批次稳定性评估
要求供应商提供抗体的克隆号、宿主来源及效价数据,每批次需进行阳性和阴性对照测试,确保不同实验室间结果的可重复性。
优先选择针对目标抗原表位高度特异性的抗体,同时需验证其在福尔马林固定石蜡包埋组织中的敏感性,避免交叉反应导致的假阳性或低表达漏检。
抗体筛选原则
染色结果判读标准
阳性信号应严格位于目标细胞特定亚结构(如细胞膜、胞浆或核),例如ER检测要求核着色,HER2需观察细胞膜完整线性染色,排除非特异性胞浆着色干扰。
定位准确性判定
采用标准化评分体系(如Allred评分用于激素受体,0-3+分级用于HER2),需由两名病理医师独立判读,对异质性区域需多点取样评估,最终结果取一致性结论。
半定量评分系统
所有染色切片必须存在明确的内对照组织(如正常上皮对照CK表达),同时设置外部阳性和阴性对照片,确保整个染色流程的质量可控。
内对照有效性核查
质量控制要点
前处理标准化
组织固定时间控制在6-72小时范围内,脱水程序需优化避免过
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