第五章薄层色谱法.pptVIP

（1）混合薄层有两种吸附剂混合制成。例如，为了降低硅胶的活度，可在其中加入一定量的硅藻土铺层，也可以用硅胶：氧化铝（1：1）铺层，对糖和醇具有较好的分离效果。（2）酸碱薄层和pH缓冲薄层在分离生物碱和氨基酸时，为了得到更好的分离效果，可在分离时加入稀碱或稀酸，或缓冲溶液代替水制成薄层。第30页，共84页。（3）配合薄层用无机试剂如硝酸银的水溶液代替水来铺制的薄层叫配合薄层,在这种薄层上可使不饱和程度不同的脂肪酸得到分离,原因Ag+不和饱和脂肪酸形成配合物,Ag+和含有一个双键的不饱和脂肪酸形成的配合物比含有两个双键的不饱和脂肪酸形成的配合物的稳定性小,因此,在配合薄层上饱和脂肪酸移动的最快,不饱和程度低的脂肪酸移动的较慢,不饱和程度高的脂肪酸移动的最慢。第31页，共84页。（4）涂布固定液的薄层（分配薄层）把固定相涂布在吸附剂上制成薄层，涂布方法有四种:①调糊法将固定相溶于适当的溶剂中制成溶液，用这种溶液代替水与吸附剂混合调成糊状，涂铺薄层。②浸渍法把固定相溶于易挥发的有机溶剂中，配成一定浓度的溶液，把薄层浸入，取出，在空气中放置使溶剂挥发，而固定相第32页，共84页。留在薄层上，此法涂布固定相均匀。操作简单，但对于不太牢固的薄层，吸附剂易从玻板上脱落。③展开法把薄层的一端放在含有固定相溶液的层析缸中向上展开一次，此法涂布的固定相不均匀，薄层下端的固定相较多，越往上越少，但不影响分离。④喷雾法把含有固定相的溶液用喷雾器喷到薄层上，这种方法比较简单，但薄层固第33页，共84页。定相分布不均匀。（5）具有浓缩区的薄层有两种不同的硅胶铺制而成，薄层前面的一段，即为浓缩区，它是由颗粒很大，比表面积很小，吸附能力很弱的硅胶铺制而成，后面的一段薄层由一般的硅胶吸附剂铺成，由于浓缩区的吸附剂极弱，在层析展开时，不论点样情况如何，试样中的各组分都迅速移动至溶剂前沿，于是第34页，共84页。在薄层交界处形成浓缩带，然后进入第2种薄层进行展开。利用这种薄层点样非常方便，分离效果也大大改善。（6）高效薄层它是由颗粒很小的硅胶和高度惰性的粘合剂铺制而成的质地十分致密、平滑的高效薄层预制板，这种薄层预制板性能十分稳定，层析展开时斑点不扩散，不拖尾，分离清晰，分离效果好。第35页，共84页。（7）荧光薄层在制备薄层时，可在吸附剂中加入荧光性物质制成荧光薄层进行分离，由于在紫外线灯照射下，整个薄层显现出荧光，而样品斑点处对紫外线能够产生吸收，不显荧光，故可检出斑点的位置。常用的无机荧光性物质是锰激活的硅酸锌ZnSiO4?Mn，在254nm的紫外线灯照射下能够产生荧光；银激活的ZnS和CdS，第36页，共84页。ZnS?CdS?Ag在366nm的紫外线照射下能够产生荧光。制备无机荧光薄层的方法是在吸附剂中加入1.5%无机荧光性物质，混合均匀调成糊状铺层。常用的有机荧光性物质是荧光素钠，可在薄层上用喷雾器喷0.04％的荧光素钠的水溶液。第三节薄层层析展开剂的选择1.展开剂的选择原则作为展开剂的要求：沸点低、较高的纯度、第37页，共84页。适当的稳定性、粘度低和低毒性。薄层层析中使用最多的是吸附薄层层析，因此我们主要介绍吸附薄层中展开剂的选择.在吸附薄层层析中，样品的分离是由于不同组分与吸附剂的吸附与解析能力的不同引起的，分离的效果主要取决于吸附剂的极性、被分离物质的极性和展开剂的极性。stahl设计了一个用于选择薄层层析条件的简图(三角图形法)第38页，共84页。第39页，共84页。由于吸附剂的选择有限，样品已经给定，因此选择合适的展开剂就是分离能否获得成功的关键,三角图形法仅仅提供了选择展开剂的原则,展开剂选择时首先要查阅文献，在前人文献的基础上再进行适当的改进就可以选择到合适的展开剂。2.展开剂的选择方法(1)试验方法第40页，共84页。①微量圆环技术:在没有合适的展开剂参考时，可以首先要选择单一溶剂作展开剂，然后再选择组合溶剂。单一溶剂组分简单，操作方便，分离选择性好。溶剂的选择可采用微量圆环技术应用微量圆环技术可简便快速的比较出被分离物质所在展开剂中的移动速度和最后所得到的分离结果。第41页，共84页。如下图所示为显微镜载玻片制成的微型薄层，