xb六、细胞融合与杂交瘤技术课件.pptVIP

第六章

细胞融合与杂交瘤技术1

2第一节细胞融合技术第二节杂交瘤技术与单克隆抗体的生产

3第一节细胞融合技术一、细胞融合概述二、细胞融合的基本原理三、细胞融合的常用方法四、融合细胞的筛选

41.定义细胞融合（cellfusion)，又称体细胞杂交（somatichybridiazation），是指两个或多个相同或不同细胞通过膜融合形成单个细胞的过程。一、细胞融合概述

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62.发生：自然界存在很多细胞融合现象，如：受精、成肌细胞融合，但频率低；细胞内吞与外排也属细胞膜融合现象；细胞内膜系统物质运输过程等。

7Muller于1838年观察到脊椎动物的肿瘤细胞能在体内自发地融合产生多核的肿瘤细胞。Virchow于1858年描述了正常组织、发炎组织以及肿瘤组织中的多核细胞现象。Luginbuhl于1873年观察到天花病人的血液中也有多核的血细胞存在。Lange于1875年第一个观察到脊椎动物（蛙类）的血液细胞发生融合的过程。Cienkawski(1876)、Buck(1877)、Geddes(1880)在无脊椎动中发现了细胞合并现象。1958年日本学者冈田善雄发现仙台病毒具有触发动物细胞融合的效应。1974年华裔加拿大学者高国楠创立了聚乙二醇（PEG）化学融合法。1975年Kohler和Milstein成功地融合了小鼠B-淋巴细胞和骨髓瘤细胞而产生能分泌预定单克隆抗体的杂交瘤细胞。20世纪80年代出现了电融合技术。3.细胞融合研究进展

8生物种类细胞来源成功年代烟草两个种间苷蓝——青菜大豆——马唐草矮牵牛——龙面花大麦——花生大麦——大豆小麦——矮牵牛油菜——大豆玉米——大豆大豆——野豌豆大麦——蚕豆大豆——草香木犀酵母菌——鸡大豆——烟草大豆——秋水仙人——胡萝卜番茄——马铃薯人——小鼠叶——叶叶——根愈伤组织——叶叶——花瓣种子——种子叶——悬浮细胞叶——花瓣叶——悬浮细胞叶——悬浮细胞悬浮细胞——悬浮细胞叶——根悬浮细胞——叶原生质体——血红细胞悬浮细胞——叶悬浮细胞——叶腹水癌细胞——原生质体叶——根尖纤维肉瘤细胞——畸胎瘤细胞197219721972197219721972197219721972197219721972197219721972197219721972几种细胞融合成功的例子

9植物融合细胞成长状态对比，右瓶为地面融合的细胞，左瓶中为太空微重力环境下融合的细胞。

10动物细胞融合实验使用的小白鼠

114.细胞融合的分类●基因型相同的细胞融合，形成的双核或多核细胞，称同核体（homokaryon）；●不同基因型的细胞融合形成的双核或多核细胞，称异核体（杂种细胞）。短期死亡；有丝分裂→双亲染色体融合→分裂成二→合核体（synkaryon）（也称单核杂种细胞）

125.细胞融合过程分四个阶段：细胞接触→细胞质膜的融合→细胞质重组→遗传物质的选择

13植物细胞融合过程人造小鼠培育过程示意图

146.细胞融合的意义理论上说任何细胞，都有可能通过体细胞杂交而成为新的生物资源。这对于种质资源的开发和利用具有深远的意义。融合过程不存在有性杂交过程中的种性隔离机制的限制，为远缘物种间的遗传物质交换提供了有效途径。体细胞杂交产生的杂种细胞含有来自双亲的核外遗传系统，在杂种的分裂和增殖过程中双亲的叶绿体、线粒体DNA亦可发生重组，从而产生新的核外遗传系统。淋巴细胞杂交瘤和单克隆抗体的制备。

15二、细胞融合的基本原理

16显微镜下细胞融合过程

17融合过程中两个细胞膜从彼此接触到破裂形成细胞桥的变化过程图解

18三、细胞融合的常用方法

19细胞融合技术分类：动物细胞融合细胞细胞融合人为方法构建植物细胞自然融合技术原生质体融合细胞拆合——人为方法，人为组合

201.生物法——仙台病毒法仙台病毒诱导细胞融合经四个阶段：两种细胞在一起培养，加入病毒，在4℃条件下病毒附着在细胞膜上，并使两细胞相互凝聚；在37℃中，病毒与细胞膜发生反应，细胞膜受到破环，此时需要Ca2+和Mg2+，最适pH为8.0一8.2；细胞膜连接部穿通，周边连接部修复，此时需Ca2+和ATP；融合成巨大细胞，仍需ATP。

21用灭活的病毒诱导的动物细胞融合过程示意图

22原理：Kao等认为，由于PEG分子具有轻微的负极性，故可以与具有正极性基团的水、蛋白质和碳水化合物等形成H键，从而在在质膜之间形成分子桥，其结果是使细胞质膜发生粘连进而促使质膜的融合；另外，PEG能增加类脂膜的流动性，也使