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交叉配血微柱凝集法具体操作流程

一、原理概述

交叉配血试验是确保临床输血安全的关键环节，其核心目的在于检测受血者血清中是否存在针对供血者红细胞的不规则抗体，以及供血者血浆中是否存在针对受血者红细胞的抗体，从而防止严重的溶血性输血反应。微柱凝集法作为当前主流的交叉配血技术之一，其原理是将抗原抗体反应与离心技术相结合。在特制的微柱凝胶介质中，红细胞与相应抗体结合后会形成免疫复合物，离心时这些复合物因无法通过凝胶间隙而被阻滞在凝胶上层或中间；反之，未结合的红细胞则能顺利沉降至微柱底部。通过观察红细胞在微柱内的沉降位置，即可判断凝集反应的结果。

二、材料准备

1.试剂：商品化微柱凝胶交叉配血卡（通常包含抗人球蛋白介质柱，部分产品可能含其他介质如盐水介质，根据实验室需求选择）、LISS溶液（低离子强度溶液，若使用）、专用洗涤液（若需要）。

2.标本：

*受血者标本：采集静脉血，置于无抗凝剂试管中，待血液凝固后离心分离血清；同时采集另一管抗凝血液（如EDTA-K?抗凝血）用于制备受血者红细胞悬液。

*供血者标本：取自供血者血袋上的配血管，内含抗凝的供血者血液，用于制备供血者红细胞悬液；若进行主侧加供血者血浆的试验，需分离供血者血浆。

3.仪器：专用微柱凝胶离心机、专用孵育器（若试验需要孵育步骤）、微量加样器及配套吸头、试管、记号笔、生物安全柜。

4.耗材：生理盐水、一次性手套、消毒用品等。

三、操作流程

（一）标本准备与核对

1.标本接收与核对：严格核对受血者和供血者标本信息，包括姓名、血型、标本编号、采集日期等，确保无误。检查标本状态，血清标本应无溶血、无细菌污染；抗凝标本应无凝块。

2.红细胞悬液制备：

*供血者红细胞悬液：取供血者抗凝全血1-2滴，加入适量生理盐水中，洗涤2-3次，每次以1000-1500rpm离心1-2分钟，弃去上清液。最后用生理盐水将压积红细胞配制成0.8%-1%的悬液。具体浓度参照试剂说明书。

*受血者红细胞悬液：同法制备受血者0.8%-1%红细胞悬液，用于次侧交叉配血或自身对照（若有必要）。

3.血清/血浆准备：将受血者血清（主侧用）和供血者血浆（次侧用，若进行）分别标记备用。确保血清清亮，无明显脂血、溶血（重度脂血或溶血可能干扰结果判读）。

（二）加样

1.取出微柱凝胶卡：检查微柱凝胶卡的完整性，确认密封完好，凝胶无干涸、无气泡、无破裂。标记受血者和供血者信息。

2.主侧管加样：在微柱凝胶卡的“主侧”反应管（通常标记为“PC”或“主”）中，按试剂说明书要求加入受血者血清（或血浆）和供血者红细胞悬液。例如，通常加入受血者血清25μL，供血者红细胞悬液50μL。加样时应将液体加至微柱反应腔的底部（凝胶表面下方），避免气泡产生。

3.次侧管加样：在“次侧”反应管（通常标记为“SC”或“次”）中，加入供血者血浆和受血者红细胞悬液。加样体积同主侧或按说明书操作。

4.自身对照管（若有）：部分实验室会设置受血者自身血清与自身红细胞的对照管，操作同主侧。

5.加LISS溶液（若需要）：某些试剂要求在加完血清和红细胞悬液后，加入一定量的LISS溶液以缩短反应时间。严格按照试剂说明书执行。

（三）孵育（根据试剂要求）

并非所有微柱凝胶交叉配血试剂都需要孵育步骤。若试剂说明书规定需要孵育，则将加样完毕的微柱凝胶卡水平放入37℃专用孵育器中，孵育规定时间（通常为15-30分钟）。孵育期间避免震动。

（四）离心

1.将微柱凝胶卡从孵育器中取出（若未孵育则直接进行），平稳放入专用微柱凝胶离心机的转子内，确保卡的方向正确。

2.按照试剂说明书设定离心参数，通常为900-1000rpm离心2-5分钟（具体转速和时间务必参照所用试剂的规定）。

3.启动离心机，离心过程中避免打开离心机盖。

（五）结果观察与判读

1.离心结束后，取出微柱凝胶卡，在良好的光线下（可使用专用观察灯）观察各反应管中红细胞的沉降情况。

2.阴性结果（配合）：红细胞完全沉降至微柱底部，形成紧密的细胞扣，凝胶柱内无红细胞残留或仅在凝胶表面有极少量散在红细胞（通常为正常现象）。

3.阳性结果（不配合）：红细胞未能完全沉降至微柱底部，而是在凝胶柱的表面、上部、中部或弥散于整个凝胶柱中。根据凝集强度可进一步分级（如1+、2+、3+、4+），具体分级标准参照试剂说明书。

4.无效结果：若凝胶柱破裂、有气泡干扰、红细胞全部浮于凝胶表面或出现其他异常情况，应判断为无效，需重新试验。

四、质量控制

1.试剂质量：严格按照试剂说明书要求储存和使用试剂，注意有效期，观察试剂是否有变质、浑浊等异常。

2.标本质量：确保标本采集合格，无溶血、脂血、细菌污染，及时处理和检测。

3.仪