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、色谱法的特点、分类和作用
1.概述
植物学家茨维特在1906年使用的装置:
色谱原型装置,如图。
色谱法是一种分离技术,
试样混合物的分离过程也就是试样中各组
分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的
分配过程。
其中的一相固定不动,称为固定相;
另一相是携带试样混合物流过此固定相的
流体(气体或液体),称为流动相。
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色谱法过程(以分配色谱法为例)
当流动相中携带的混合物流经固定相时,
其与固定相发生相互作用。由于混合物中各组
分在性质和结构上的差异,与固定相之间产生
的作用力的大小、强弱不同,随着流动相的移
动,混合物在两相间经过反复多次的分配平衡
,使得各组分被固定相保留的时间不同,从而
按一定次序由固定相中流出。与适当的柱后检
测方法结合,实现混合物中各组分的分离与检
测。
两相及两相的相对构成了色谱法的基础
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2.色谱法分类
FourmajortypesofChromatography
•Thinlayerchromatography(薄层色谱)
•Gaschromatography(气相色谱)
•Liquidchromatography(液相色谱)
•Supercriticalfluidchromatography(超临
界流体色谱)
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气相色谱:
流动相为气体(称为载气)。
按分离柱不同可分为:填充柱色谱和毛细管柱色谱;
按固定相的不同又分为:气固色谱和气液色谱
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液相色谱
流动相为液体(也称为淋洗液)。
按固定相的不同分为:液固色谱和液液色谱。
离子色谱:液相色谱的一种,以特制的离子交换树脂为固
定相,不同pH值的水溶液为流动相。
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液相色谱也包括
•尺寸排阻色谱法
分离机理和分配色谱不同
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其他色谱方法
薄层色谱和纸色谱:
比较简单的色谱方法
高效毛细管电泳:
九十年代快速发展、
特别适合生物试样分析分
离的高效分析仪器。
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色谱分离过程
当试样由流动相携带进入色
谱柱与固定相接触时,被固定
相结合或吸附。
随着流动相的不断通入,被
结合或吸附的组分又从固定相
中解结合或脱附,
组分随着流动相向前移动时
又再次被固定相溶解或吸附。
随着流动相的流动,结合、
解结合或吸附、脱附的过程反
复进行。
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分配系数K
组分在固定相和流动相间发生的吸附、脱附,或溶解、
挥发的过程叫做分配过程。在一定温度下,组分在两相间
分配达到平衡时的浓度(单位:g/mL)比,称为分配系数,
用K表示,即:
组分在固定相中的浓度
K
组分在流动相中的浓度
右图以气相色谱为例
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分配系数K的讨论
组分在固定相中的浓度
K
组分在流动相中的浓度
试样中的各组分具有不同的K值是分离的基础;
一定温度下,组分的分配系数K越大,出峰越慢;
试样一定时,K主要取决于固定相流动相的性质;
每个组份在各种固定相上的分配系数K不同;
选择适宜的固定相可改善分离效果;
某组分的K=0时,即不被固定相保留,最先流出。
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