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B固定液的配制锇酸固定液的配制2%的锇酸固定液的配制：清洗烘干器皿--1G锇酸+50ml双蒸水（棕色瓶）数日可用。0.1mol/L磷酸盐缓冲液或二甲坤酸盐缓冲液配制的1%锇酸固定液。2%的锇酸缓冲液10ml0.2mol/L缓冲液10ml调节PH应为7.3-7.4第29页，共55页，星期日，2025年，2月5日戊二醛固定液的配制25%戊二醛（ml）0.411.6重蒸水（ml）4.643.40.2ml/L缓冲液（ml）555戊二醛最终浓度12.54调节固定液PH值到7.3-7.4第30页，共55页，星期日，2025年，2月5日（3）??脱水1）???清洗:固定后均用和固定液相同的缓冲液冲洗3次，每次15分钟2）?脱水：常用的脱水剂为乙醇和丙酮。乙醇引起组织中脂类物质抽提较丙酮少，且不会使组织变硬、变脆，故为常用脱水剂，然乙醇不容易和用于包埋剂的环氧树脂相混溶，因此在进入包埋剂之前常用中间剂环氧丙烷置换。第31页，共55页，星期日，2025年，2月5日脱水程序如下表浓度50%70%90%100%时间10′-15′10′-15′10′-15′3次（每次10′-15′）温度4oC4oC转室温室温第32页，共55页，星期日，2025年，2月5日经验：①脱水剂临时配制。②浓度梯度上升。③脱水时间和浓度。④脱水时的连续性。⑤脱水剂的选择。第33页，共55页，星期日，2025年，2月5日（4）浸透：其目的是通过脱水剂稀释包埋剂，最终让包埋剂取代脱水剂，使其渗透到组织中去。脱水和包埋剂的比例2:11:2纯包埋剂时间1-2h2-3h2h温度室温室温37oC温箱第34页，共55页，星期日，2025年，2月5日经验：①浸透时间。②浸透温度。第35页，共55页，星期日，2025年，2月5日（5）包埋：目的:包埋的目的是让包埋剂完全浸透到组织内部，经加温逐渐聚合成坚硬的固体，成为细胞结构的支架，能够承受切片的各种力的作用，有利于切薄片。包埋剂的性质:①粘度适中，有良好的切割性能。②能耐受电子束的轰击，高温不易升华、不变形。③透明度好。④对人无害。第36页，共55页，星期日，2025年，2月5日包埋剂的种类①环氧树脂类：目前国内使用较多的环氧树脂有进口的Epon812和国产的618。原理:环氧树脂具有环氧基和羟基两个主要化学反应基团，环氧基是线型聚合物的末端，易与其它含活性氢原子的化合物如胺类反应，形成首尾相接的长链状聚合物。而单体中的羟基能与酸酐结合，形成分子间的横桥连接。因此，将环氧树脂、胺类和酸酐三者按比例混合，在一定温度条件下，可形成具有三维空间结构的交链状聚合物。第37页，共55页，星期日，2025年，2月5日这种聚合物收缩率小、均匀，组织损伤小，耐电子束的轰击。包埋后可保存细胞内的微细结构。其缺点是粘度较大，操作不便、切片较为困难，而且反差较弱。第38页，共55页，星期日，2025年，2月5日②低粘度包埋剂(Spurr)为适应临床诊断电镜的需要，目前低粘度包埋剂的应用已日趋广泛。这是一种低粘度的树脂，能较好地渗入组织内部，对组织结构保存好，耐电子束轰击，可广泛应用于各种生物材料，尤其适宜于较致密的组织。第39页，共55页，星期日，2025年，2月5日第1页，共55页，星期日，2025年，2月5日第2页，共55页，星期日，2025年，2月5日第3页，共55页，星期日，2025年，2月5日第4页，共55页，星期日，2025年，2月5日冷冻蚀刻法超薄切片第5页，共55页，星期日，2025年，2月5日冷冻蚀刻法冷冻割断术第6页，共55页，星期日，2025年，2月5日细胞化学法第7页，共55页，星期日，2025年，2月5日免疫组织化学技术免疫电镜法第8页，共55页，星期日，2025年，2月5日电镜放射自显影术放射自显影技术第9页，共55页，星期日，2025年，2月5日扫描电镜技术被吞噬的红细胞第10页，共55页，星期日，2025年，2月5日现有的透射电镜生物制品制备技术分为两类：一类是透射电镜的基本制备技术，包括超薄切片和负染色法；另一类是生物制品的特殊技术，其中包括冷冻蚀刻法、冰冻割断术、细胞化学法、免疫电镜法、放射自显影