第11章 高效液相色谱法.pptVIP

4.选择流动相时应注意的几个问题（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。（2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。（4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。第30页，共53页，星期日，2025年，2月5日11.5高效液相色谱仪

highperformanceliquidchromatograph第31页，共53页，星期日，2025年，2月5日液相色谱仪（2）第32页，共53页，星期日，2025年，2月5日液相色谱仪（3）第33页，共53页，星期日，2025年，2月5日液相色谱仪（4）第34页，共53页，星期日，2025年，2月5日流程及主要部件

processandmainassemblyofHPLC流程四个主要部分：液体输送系统进样系统分离系统检测系统第35页，共53页，星期日，2025年，2月5日11.5.1液体输送系统高效液相色谱仪器的输液系统包括贮液瓶、高压泵、梯度洗脱装置等。1.贮液瓶（1）对贮液瓶的要求。贮液瓶又称溶剂贮存器，主要用来供给足够数量的符合要求的流动相以便完成分析工作。对于溶剂贮存器的要求是：①必须有足够的容积，以备重复分析时保证供液；②脱气方便；③能耐一定的压力；④所选用的材质对所使用的溶剂都是惰性的。第36页，共53页，星期日，2025年，2月5日（2）脱气方法。贮液瓶常用的脱气方法有：①低压脱气法。电磁搅拌、水泵抽真空。不适于二元以上冲洗剂组成的流动相脱气。②吹氦脱气法。此法简单方便，适用于所有冲洗剂脱气。③超声波脱气法。将冲洗剂瓶置于超声波清洗槽中，以水为介质超声脱气。方便，不影响溶剂组成，并适用于各种溶剂，目前国内使用较为普遍。使用此法时应注意避免将溶剂瓶与超声波清洗槽底或壁的接触，以免瓶子破裂。第37页，共53页，星期日，2025年，2月5日2.高压输液泵主要部件之一，压力：150～350×105Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性（动画）第38页，共53页，星期日，2025年，2月5日第11章高效液相色谱法第1页，共53页，星期日，2025年，2月5日11.1高效液相色谱法概述

featureofHPLC11.1.1发展和特点：高压、高效、高速、高灵敏度高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。第2页，共53页，星期日，2025年，2月5日（1）高压。液在现代液相色谱法中流动相的柱前压力可达150～350×105Pa，这对于输送高压液体的泵、色谱柱、色谱填料（色谱固定相）及整个流路系统的耐压指标都提出了很高的要求。（2）高速。流速一般可达1～10mL?min-1，使得高效液相色谱法所需的分析时间比经典液体柱色谱法少的多，一般都少于1h，而若采用经典色谱法，则往往需要十几个小时。（3）高效。约达3万块塔板/米，而气相色谱的分离效能则一般仅为2000块塔板/米。（4）高灵敏度。采用高灵敏度的检测器，如荧光检测器的灵敏度可达10-11g，微升数量级的试样就足以进行分析，极大地减少了分析时所需试样量。第3页，共53页，星期日，2025年，2月5日11.1.3高效液相色谱与气相色谱法的比较1.HPLC与GC的共同点（1）气相色谱的理论基本上也适用于高效液相色谱。（2）定性、定量的原理和方法完全一样。（3）一样可与其他分析仪器联用.2.HPLC与GC的不同点（1）分析对象。对于高沸点、热稳定性差、相对分子质量大、难气化的有机物），原则上都可用高效液相色谱法来进行分离、分析。对于要求柱效达10万块理论塔板数以上的、组成复杂的石油样品，受热易分解、变性的生物活性样品，只能应用高效液相色谱法进行分析，而不能使用气相色谱法进行分析。第4页，共53页，星期日，2025年，2月5日（2）流动相。气相色谱的流动相为气体，主要起携带组分流经色谱柱的作用，待分离组分几乎不与流动相发生相互作用。对于高效液相色谱而言，流动相的种类较多且选择余地广，组分与流动相有相互作用，流动相的极性、pH等的选择也会对分离起重要作用，可选用两种或两种以上液体作为流动相，从而为提高柱的选择性、改善分离度增加了可调控条件。（3）操作条件及