海洋生物化学实验教案.pptVIP

实验十、酵母RNA的提取及鉴定一、原理酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于2%。RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，有此可得粗RNA制品。第61页，共111页，星期日，2025年，2月5日二、实验仪器离心机水浴锅电炉烧杯量筒第62页，共111页，星期日，2025年，2月5日三、实验试剂干酵母粉0.2%氢氧化钠溶液：2g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至1000ml。乙酸95%乙醇无水乙醚10%硫酸氨水5%硝酸银溶液：5g硝酸银溶于蒸馏水并稀释至100ml，贮于棕色瓶中。苔黑酚-三氯化铁溶液：将100mg苔黑酚溶于100ml浓盐酸中，再加入100mgFeCl3.6H2O。临用时配制。第63页，共111页，星期日，2025年，2月5日四、实验步骤1.RNA的提取：称取4g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%氢氧化钠溶液40ml，沸水浴加热30分钟，经常搅拌。然后加入乙酸数滴，使提取液呈酸性（石蕊试纸），离心10-15分钟（4000r.p.m）。取上清液，加入95%乙醇30ml，边加边搅，加毕，静止，待完全沉淀，过滤。滤渣先用95%乙醇洗2次，每次约10毫升，再用无水乙醚西2次，每次也约10ml。洗涤时可小心地用玻璃棒搅动沉淀。乙醚滤干后，滤渣即为粗RNA，可鉴定。第64页，共111页，星期日，2025年，2月5日2.鉴定：取上述RNA约0.5g，加10%硫酸5ml,加热至沸1—2分钟，将RNA水解。取水解液0.5ml，加入苔黑酚-三氯化铁溶液1ml，加热至沸1分钟，观察颜色变化。水解液2ml，加入氨水2ml和5%硝酸银溶液1ml，观察是否产生絮状嘌呤银化合物。第65页，共111页，星期日，2025年，2月5日实验十一DNA的定量测定-二苯胺法一、原理DNA分子中的脱氧核糖基，在酸性溶液中变成-羟基-a-酮基戊糖，与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物，在一定波长范围内，化合物蓝色的深浅与DNA的含量成比例关系，可用比色法测定。第66页，共111页，星期日，2025年，2月5日二、实验仪器试管移液管7220分光光度计第67页，共111页，星期日，2025年，2月5日三、实验试剂1、DNA标准液（100ug/ml）：称取10mgDNA钠盐溶于5mol/l氢氧化钠溶液并稀释至100ml。2、二苯胺试剂：A液：称取纯二苯胺1.50g，溶于100ml冰乙酸，再加浓硫酸1.5ml。贮于棕色瓶中。B液：称取1.6ml乙醛溶于100ml蒸馏水中，临用时配制临用时，将20mlA液和0.1mlB液混合即可第68页，共111页，星期日，2025年，2月5日四、试验步骤1.标准曲线的绘制取干燥的试管6支，编号，按下表加入试剂：012345DNA标准液00.20.40.60.81.0蒸馏水1.00.80.60.40.20二苯胺试剂2.02.02.02.02.02.0加毕，混匀，在60度水浴中保温45分钟，冷却后，在595nm波长下测吸光度，以吸光度对DNA浓度作标准曲线。第69页，共111页，星期日，2025年，2月5日2.样品测定吸取DNA样液1ml，加入二苯胺溶液2.0ml,加毕，混匀，在60度水浴中保温45分钟，冷却后，在595nm波长下测吸光度，根据所测得的吸光度对照标准曲线求得DNA的质量。五、结果计算按下式计算样品中DNA百分含量：DNA%=样液中测的DNA量/样液中所含样品量*100%第70页，共111页，星期日，2025年，2月5日实验十二维生素C的定量测定（2，6-二氯靛酚滴定法）一、原理维生素c又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料2，6-二氯靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。在酸性溶液中，2，6-二氯靛酚成红色，被还原后变为无色。因此可用2，6-二氯靛酚滴定样品中含有的维生素C，当样品中的维生素C被完全还原后，在滴加过量的2，6-二氯靛酚，溶液变为淡红色，即为终点。如无其他杂质干扰，则样品液所还原的2，6-二氯靛酚的量与样品中所含有维生素C的量成正比。第71页，共111页，星期日，2025年，2月5日二、实验仪器新鲜水果吸管容量瓶滴定装置锥形瓶研钵漏斗第72页，共111页，星期日，2025年，2月5日三、实验试剂1、2%草酸溶液：草酸2g，溶于100ml蒸馏水。2、1%草酸溶液：草酸1g，溶于100ml蒸馏水。3、标准维生素C液：准确称取10.0mg维生素C，溶于1%草酸溶液，并稀释至100ml，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用时配制。此溶液浓度0.1mg/ml.4、0.1%2，6-二氯靛酚溶液：称取5