2023年浙江大学考研生物化学真题含详细解析.pdfVIP

浙江大学—考研生物化学真题含（解析）

、真题解析

1、简述SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳得基本理，你使用该技术分离和检测过何种物质？重

要操作步骤有哪些？

该题是试验操作中时常考题

SDS-PAGE：当SDS与蛋白质结合后，蛋白质分子即带有大量的负电荷，从而掩盖了

天然蛋白质分子间的电荷差异。与此同步蛋白质在SDSII勺作用下构造变得松散，形状趋向

一致，因此多种SDS•蛋白侦复合物在电泳时产生的泳动率差异，只反应了分子量口勺差异，

即纯运用分子筛效应，按蛋白质分子量大小进行分离，分子量越大移动越慢。

•应用

SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳还可以用于未知蛋白分子量的测定，在同一凝胶上对一系列

己知分子星rJ则蛋白及未知蛋白进行电泳，测定各个时则蛋白的I电泳距离（或辽移率），

并对各自分子量口勺对数（logMr）作图，即得到则曲线。测定未知蛋白质H勺电泳距离（或

迁移率），通过则曲线就可以求出未知蛋白FI勺分子量。

SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳常常应用于提纯过程中纯度的检测，纯化U勺蛋白质一般在

SDS电泳上应只有一条带，但假如蛋白质是由不一样的亚基构成口勺，它在电泳中可能会形

成分别对应于各个亚基的几条带。SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高的敏捷度，一般只需

要不到微克量级日勺蛋白质，而且通过电泳还可以同步得到有关分子量日勺状况，这些信息对于

了解未知蛋白及设计提纯过程都是非常重要的。

SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于单链DNA、寡核甘酸片断以及蛋白质亚基，膜蛋白、

肽类等物质口勺分析，还可以用于研究大分子的折叠构造等方面。

•基本操作

SDS-PAGE的基本操作和聚丙烯酰胺凝胶电泳相近，其支持介质都是聚丙烯酰胺凝胶，因

此在制胶、加样和电泳仪器都都相似或相近，区别H勺是SDS-PAGE需要有则蛋白溶液及

供试品溶液的制备，样品预先需要用SDS处理。一般采用取则蛋白，加水制成每1ml中

含2〜5mg的溶液，与水解液取（尿素21.6g和十二烷基硫酸钠0.04g,溶于40ml水中“：3

混合，置冰箱中过夜。供试品照上述措施配制。此外，在电泳结束后来，需要对相对迁移率

和分了•进行计算将电泳脱色后的区带用卡尺或用扫描定位法测染料移动的距离、染色

前胶条长度、蛋白移动距离和脱色后口勺胶条长度。

2、质粒是基因工程中最常用得载体，为获得某种质粒如（pUC18）DNA,请你设计一种简朴

得试验过程步（骤）。

大肠杆菌质粒DNA的I樨取碱（裂解法）

此措施合用于小鼠质粒DNA曰勺提取提取的质粒DNA可直接用于酶切PCR扩增。

1.取1.5ml组菌培养物于EP管中，4000rpm离心1分钟，弃上清液，使细菌沉

淀尽干燥；

2.将细菌沉淀重悬于用冰预冷的I100用溶液I（50mmol/L葡萄糖，10mmol/L

EDTApH8.0,25mmcl/LTrs-1IC1pH8.0）中，剧烈振荡；

3.加入200■新配制H勺溶液11（0.2mol/LNaOH,I%SDS（m/v））,盖紧EP

管口，迅速颠倒离心管5次，以混合混合物，保证离心管的整个内表面与溶液II接触,

不要涡旋，置于冰浴中;

4.加入150Pl预冷溶液III（每100ml口勺溶液III中含60ml5mol/L乙酸

钾，11.5ml冰乙酸，28.5mlH.0）,盖紧EP管口，反复颠倒多次，使溶液III在粘稠

R勺细菌裂解物中分散均匀，之后