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低聚糖肠道菌群调节机制实验研究

目录

一、文档综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.2国内外研究进展概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

1.3研究目标与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

1.4技术路线与创新点．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

二、材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

2.1实验材料与试剂．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

2.1.1低聚糖样品与特性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

2.1.2实验试剂与配制方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

2.1.3主要仪器设备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

2.2实验对象与分组设计．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

2.2.1实验模型选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

2.2.2分组方案与饲养条件．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

2.3肠道菌群检测方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

2.3.1粪便样本采集与前处理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

2.3.2菌群多样性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33

2.3.3特定菌群定量检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36

2.4肠道屏障功能评估．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38

2.4.1血清炎症因子水平测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42

2.4.2肠黏膜屏障相关指标检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43

2.5数据统计与分析方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46

三、低聚糖对肠道菌群结构的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．47

3.1菌群多样性变化分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．48

3.1.1α多样性指数比较．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．49

3.1.2β多样性差异评估．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．51

3.2优势菌群组成与丰度变化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．52

3.2.1门水平菌群结构演变．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．55

3.2.2属水平关键菌群鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．56

3.3短链脂肪酸生成情况．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．59

3.3.1SCFAs含量测定结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．62

3.3.2产SCFA功能菌群关联性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．65

四、低聚糖调节肠道菌群的分子机制探讨．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．66

4.1菌群代谢产物与宿主互作研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．68

4.1.1短链脂肪酸对免疫信号通路的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．70

4.1.2肠道上皮细胞基因表达调控．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．73

4.2肠道屏障功能与菌群关系．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．75

4.2.1紧密连接蛋白表达变化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．76

4.2.2黏液层结构与分泌状态分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．80

4.3炎症反应与菌群失调的改善机