基于通用真菌引物和探针的人全血标本侵袭性真菌DNA载量检测方法探究.docxVIP

基于通用真菌引物和探针的人全血标本侵袭性真菌DNA载量检测方法探究

一、引言

1.1研究背景与意义

侵袭性真菌病（InvasiveFungalDiseases,IFD）是指真菌侵入人体组织、血液，并在其中生长繁殖导致组织损害、器官功能障碍和炎症反应的病理改变及病理生理过程。近年来，随着人口老龄化加剧、靶向药物和免疫疗法的广泛应用，免疫缺陷患者人数不断增多，IFD的发病率呈显著上升趋势。据统计，全球每年约3亿人罹患严重的真菌感染，其中IFD年发病率约27.2例/10万例，且以每年0.9%的比例增加，致死率高达27.6%。在我国，IFD同样给患者带来了沉重的负担，尤其是对于患有恶性肿瘤、血液病、呼吸系统疾病、艾滋病和重症肝病等免疫功能缺陷的高风险群体而言，一旦合并侵袭性真菌感染，病死率更是高达39%-100%。

IFD的常见致病真菌包括念珠菌、曲霉、肺孢子菌、隐球菌和毛霉等。其中，念珠菌和曲霉是最为常见的致病菌，约占真菌感染的90%左右。念珠菌侵袭性念珠菌病发病的一个非常重要的前提因素就是念珠菌定植，尤其是在呼吸道、胃肠道、以及支气管穿刺点附近的定植。而曲霉主要以孢子的形式通过空气吸入人体，在正常情况下，几乎不存在曲霉定植的情况。侵袭性肺曲霉病主要发生在免疫功能严重受损的宿主，易感人群主要包括慢性肉芽肿病、长时间粒细胞缺乏症患者、造血干细胞移植及实体器官移植患者、长期大量应用糖皮质激素、慢阻肺、肝衰竭、肝硬化等患者。

IFD的诊断目前仍面临诸多挑战。其临床表现不典型，常与基础疾病或其他感染性疾病的症状相似，难以早期识别。例如，肺部是IFD最常见的感染部位，侵袭性肺真菌病的症状可能包括发热、咳嗽、咳痰、胸痛等，这些症状与细菌性肺炎、病毒性肺炎等极为相似，容易导致误诊。目前，IFD的诊断方法主要包括直接镜检、组织培养、血培养、G试验、GM试验、隐球菌荚膜多糖抗原测定和分子学方法等。直接镜检虽然快速、简便，但阳性率较低，漏诊率高达45％，且阴性结果不能排除诊断。组织培养是诊断的金标准之一，但培养时间长，一般需要7d，特殊情况需要2-4周以上，对于病情危急的患者来说，往往无法及时提供诊断依据。血培养对于念珠菌感染有一定的诊断价值，但对于其他真菌的检出率较低。G试验适用于除隐球菌和接合菌（根霉、毛霉等）以外的深部真菌感染的早期诊断，但具有假阳性和假阴性。GM试验可用于曲霉菌早期诊断，但其对严重免疫抑制/粒细胞缺乏患者侵袭性曲霉病敏感性好，对非免疫抑制/非粒细胞缺乏患者侵袭性曲霉病敏感性低。隐球菌荚膜多糖抗原测定能早期、快速诊断隐球菌感染，但对于其他真菌的诊断无能为力。分子学方法如PCR技术，虽然具有操作简单、特异性强、灵敏度高和时间短的优点，但目前单一PCR阳性检测的敏感性和特异性仍有待提高，且不同研究报道的结果差异较大。

在这样的背景下，建立一种快速、准确、灵敏的检测方法对于IFD的早期诊断和治疗至关重要。通用真菌引物和探针检测人全血标本中侵袭性真菌DNA载量的方法应运而生。该方法通过设计特异性的通用真菌引物和探针，利用实时定量PCR技术，能够快速、准确地检测人全血标本中侵袭性真菌的DNA载量。这一方法具有诸多优势，首先，其检测灵敏度高，能够检测到极低浓度的真菌DNA，有助于早期发现感染。其次，特异性强，能够准确地区分真菌与其他病原体，减少误诊的发生。此外，该方法检测周期短，能够在短时间内为临床医生提供诊断依据，便于及时制定治疗方案。通过对人全血标本中侵袭性真菌DNA载量的检测，医生可以更准确地判断患者是否感染真菌，以及感染的程度，从而为临床治疗提供有力的支持。这对于提高IFD的诊断准确率，降低病死率，改善患者的预后具有重要的意义。

1.2国内外研究现状

在国外，侵袭性真菌病的诊断研究一直是医学领域的重点。美国、欧洲等发达国家和地区投入了大量资源进行相关研究。早在20世纪90年代，就有研究开始探索分子生物学技术在IFD诊断中的应用。随着技术的不断进步，实时定量PCR技术逐渐成为研究热点。一些研究通过设计针对特定真菌的引物和探针，实现了对念珠菌、曲霉等常见致病真菌的检测。例如，有研究利用TaqMan探针实时定量PCR技术，对血液中的曲霉DNA进行检测，取得了较好的敏感性和特异性。此外，二代测序技术（NGS）也逐渐应用于IFD的诊断研究中，它能够同时检测多种真菌，为临床诊断提供更全面的信息。

国内对于侵袭性真菌病诊断方法的研究也在不断深入。近年来，随着国内医疗水平的提高和科研投入的增加，相关研究成果不断涌现。一些研究团队致力于开发新