微生物实验显微镜直接计数法.pptVIP

第1页，共14页，星期日，2025年，2月5日二、实验原理1.血球计数板法利用计数板上有固定体积和精确刻度的两个计数室进行计数，是常用的在显微镜下对细胞数目进行计数的方法。具有直观、快速等优点，但误差较大，不适合细菌计数。（1）计数室体积：正方形，边长为1mm，深0.1mm→盖上盖玻片后，容积为0.1mm3。（2）计数室刻度的规格16×25型：16个中方格，每个中方格分25个小格；25×16型：25个中方格，每个中方格分16个小格。第2页，共14页，星期日，2025年，2月5日计数室第3页，共14页，星期日，2025年，2月5日第4页，共14页，星期日，2025年，2月5日（3）计数和计算方法我们采用的是25×16的，计数时查5个中方格的总菌数。如图：计算：1个计数室的总菌数=A/5×25×B1g（ml）样品中的总菌数=A/5×25×10×1000×B=50,000A×B个5个方格的总菌数稀释倍数第5页，共14页，星期日，2025年，2月5日2.测定生长量的其他方法平板菌落计数法、干重法和比浊法等。（1）平板菌落计数法（2）干重法（适合浓度较高的样品）取一定量菌液中→离心或过滤，分离菌体→烘干至恒重(温度可采用105℃、100℃或80℃)→称重。一般干重为湿重的10%-20%。第6页，共14页，星期日，2025年，2月5日第7页，共14页，星期日，2025年，2月5日（3）比浊法在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比，即与吸光值成正比，菌数越多，吸光值越大。因此，借助于分光光度计，在一定波长下测定菌悬液的光密度，就可反应出菌液的浓度。该法适合测定浓度较高的样品。第8页，共14页，星期日，2025年，2月5日三、实验材料1.菌种：酵母菌（Saccharomycescerevisiae）悬液(已稀释100倍)2.器具：显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片。四、实验步骤1.检查计数板检查计数板是否有破损。2.镜检计数室在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。第9页，共14页，星期日，2025年，2月5日3.加样品在清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用细口滴管将酵母菌稀释液由盖玻片边缘点一小滴（不宜过多），让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。第10页，共14页，星期日，2025年，2月5日