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pcr考试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共20分）

1.PCR反应的基本步骤不包括（）

A.变性B.复性C.转录D.延伸

2.PCR技术的发明人是（）

A.穆利斯B.沃森C.克里克D.桑格

3.以下哪种酶用于PCR反应（）

A.DNA连接酶B.Taq酶C.限制性内切酶D.反转录酶

4.PCR反应中引物的作用是（）

A.提供模板B.提供能量C.引导DNA合成D.终止反应

5.进行PCR反应时，常用的变性温度是（）

A.55℃B.72℃C.95℃D.100℃

6.复性温度一般比引物的Tm值低（）

A.1-5℃B.5-10℃C.10-15℃D.15-20℃

7.PCR反应体系中不包含（）

A.dNTPB.缓冲液C.蛋白质D.Mg2?

8.提高PCR反应特异性的方法不包括（）

A.优化引物设计B.降低退火温度C.调整Mg2?浓度D.热启动PCR

9.多重PCR是指（）

A.多个模板的PCRB.多个引物对的PCR

C.多次循环的PCRD.多个Taq酶的PCR

10.RT-PCR的第一步是（）

A.逆转录B.变性C.复性D.延伸

二、多项选择题（每题2分，共20分）

1.PCR技术的特点有（）

A.特异性强B.灵敏度高C.快速D.简便

2.影响PCR反应的因素包括（）

A.引物B.模板C.Taq酶D.反应温度

3.以下属于PCR引物设计原则的是（）

A.长度适宜B.GC含量合理C.避免形成引物二聚体D.特异性强

4.PCR反应中的缓冲液成分包括（）

A.Tris-HClB.KClC.MgCl?D.NaCl

5.PCR产物的分析方法有（）

A.琼脂糖凝胶电泳B.聚丙烯酰胺凝胶电泳C.测序D.酶切分析

6.实时荧光定量PCR的应用有（）

A.基因表达分析B.病原体定量检测C.单核苷酸多态性分析D.甲基化分析

7.巢式PCR的优点有（）

A.提高灵敏度B.提高特异性C.降低假阳性D.可扩增更长片段

8.降落PCR的特点是（）

A.退火温度逐渐降低B.提高特异性C.增加引物与模板结合机会D.用于复杂模板

9.用于PCR的模板可以是（）

A.基因组DNAB.线粒体DNAC.RNAD.cDNA

10.PCR技术在下列哪些领域有应用（）

A.疾病诊断B.法医鉴定C.分子育种D.考古学

三、判断题（每题2分，共20分）

1.PCR反应中引物可以随意设计。（）

2.Taq酶具有3-5外切酶活性。（）

3.PCR产物的长度由引物决定。（）

4.复性温度越高，PCR反应的特异性越强。（）

5.Mg2?浓度过高会抑制PCR反应。（）

6.实时荧光定量PCR能对基因进行绝对定量。（）

7.反转录PCR可以直接以RNA为模板进行扩增。（）

8.普通PCR能检测基因表达水平的差异。（）

9.引物二聚体不会影响PCR反应结果。（）

10.巢式PCR需要两对引物。（）

四、简答题（每题5分，共20分）

1.简述PCR反应的基本原理。

答案：PCR基于DNA半保留复制原理。在高温下模板DNA变性解链，低温时引物与模板复性结合，适宜温度下Taq酶以dNTP为原料，从引物3端延伸合成新的DNA链，经多轮循环使目的DNA片段大量扩增。

2.引物设计时应注意哪些要点？

答案：长度18-25bp为宜；GC含量40%-60%；避免引物自身或引物之间形成二聚体；引物3端避免出现连续相同碱基；具有特异性，与模板准确互补配对。

3.简述实时荧光定量PCR的原理。

答案：在PCR反应体系中加入荧光基团，荧光信号强度与PCR产物量成正比。随着循环数增加，荧光信号累积，通过监测荧光信号，利用标准曲线对起始模板进行定量分析。

4.比较普通PCR和实时荧光定量PCR的区别。

答案：普通PCR主要用于扩增特定DNA片段，通过电泳等方法分析产物有无及大小。实时