基因重组与基因工程课件.pptVIP

基因重組與基因工程基因重組：genomicrecombination重組DNA：recombinantDNA第一節、自然界的基因重組轉化：transformation整合：integration轉導：transduction轉位：transposition轉化轉化：由外來DNA引起生物類型改變的過程稱為轉化。細菌的轉化轉化病毒癌基因感染宿主細胞後，可整合到宿主染色體上，從而使宿主細胞癌變。轉染：噬菌體感染宿主菌後，核酸進入菌體內的過程。細胞的轉化整合整合：?噬菌體感染大腸桿菌的第一步?噬菌體粘附於細胞壁上，將自身的?DNA注入菌體中。此?DNA可與細菌染色體重組，成為細菌染色體的一部分。溶原菌：整合了噬菌體基因組的細菌。裂解：?噬菌體感染大腸桿菌的第二步?DNA利用菌體的酶系統，複製自身及外殼蛋白，組裝成大量新?噬菌體，並將細菌漲破。整合溶原和裂解可以相互轉變。轉導溶原菌中?DNA可以原樣地切離出來，也可以把鄰近的宿主DNA在切離時帶走一部分。後者稱轉導。帶有宿主DNA的噬菌體稱轉導噬菌體。來源於宿主的基因稱轉導基因。轉位轉位：一個或一組基因從一處轉到基因組的另一個位置。這些遊動的基因稱為轉位子(transposon)。轉位第二節、基因工程基因工程：是用分離純化或人工合成的DNA在體外與載體DNA結合，成為重組DNA，用以轉化宿主，篩選出能表達重組DNA的活細胞，加以純化、傳代、擴增，成為克隆。也叫基因克隆或重組DNA技術。分子水準上操作，細胞水準上表達。賦予重組DNA以新的生命力。基因工程腫瘤細胞的轉移與細胞表面的糖鏈類型有關，而後者又與糖基轉移酶的表達相關。已經證實GnT-Ⅴ與轉移有關。轉入GnT-Ⅴ基因肝癌細胞株SMMC7721觀察其遷移、侵襲、粘附等生物學行為轉入反義GnT-Ⅴ基因轉移?轉移?基因克隆分切接轉篩載體和目的基因載體：vector在宿主細胞內可獨立複製的完整DNA分子。但必須利用宿主的酶系統，才能有進一步的基因表達能力。常用的載體有：質粒、?噬菌體、M13噬菌體逆轉錄病毒DNA、昆蟲病毒DNA載體與宿主共培育可大量生成，經純化後可用於基因工程。質粒質粒：plasmid環形雙鏈DNA，大小約為數千堿基對，存在於大多數細菌的胞質中。拷貝數：每個細菌能容納的質粒數目。質粒的性質：易於從一個細菌轉移入另一個細菌。有兩三個抗藥性基因。有一個限制性內切酶切口。質粒pBR322：常用的質粒噬菌體載體?噬菌體、M13噬菌體易於感染大腸桿菌?噬菌體DNA比質粒大，對限制性內切酶有不止一個切口，需經過改造。一個切口：插入型載體。二個切口：置換型載體。噬菌體載體目的基因的來源直接從染色體DNA中分離：原核生物人工合成：簡單的多肽從mRNA合成cDNA：真核生物基因文庫：(genelibrary）G文庫：用基因組的全部DNA製備。c文庫：用細胞的全部mRNA製備出全套cDNA後建庫。從mRNA合成cDNA限制性內切酶的應用限制性內切酶可辨認4~6個核苷酸：回文結構回文結構：palindromeDNA雙鏈具有方向相反順序一致的結構。平端：bluntend在同一水準上切斷兩條鏈。(鈍型末端)粘性末端：stickyend堿基序列被酶以錯開幾個核苷酸的形式切開。限制性內切酶的應用AluI….AGCT…..….AGCT...平端…..TCGA…..….TCGA...BamHI…GGATCC…...GGATTC…粘性...CCTAGG……CCTAAG