基因重组技术课件.pptVIP

*根據受體細胞不同大腸桿菌載體酵母載體動物基因工程載體植物基因工程載體等3基因重組技術

3.4基因重組技術的載體

3.4.2載體的種類*質粒(plasmid)的定義：質粒是染色體外能自我複製的小型DNA分子。廣泛存在於細菌細胞中，也存在於黴菌、藍藻、酵母和少數動植物細胞中，甚至線粒體中都發現有質粒的存在。注意：酵母的殺傷質粒（killerplasmid）為RNA質粒。3基因重組技術

3.4基因重組技術的載體

3.4.3質粒載體質粒載體是基因重組中最常用的載體，主要是以細菌質粒的各種元件為基礎組建而成的。它必須包含有三種共同的組成部分：複製必須區、選擇標記基因和限制性核酸內切酶的酶切位點（克隆位點）。*克隆質粒載體專用於基因或DNA片段無性繁殖的質粒載體。選擇標記基因克隆位點複製必需區保證質粒拷貝數便於插入外源DNA篩選重組子3基因重組技術

3.4基因重組技術的載體

3.4.3質粒載體*表達質粒載體專用於在宿主細胞中高水準表達外源蛋白質的質粒載體。除了具有克隆質粒載體的三個基本構件外，還需要有能控制插入的外源基因進行有效轉錄的序列以及適當的翻譯調控序列。啟動子PLac來源於大腸桿菌（乳糖操縱子）、PTrp(色氨酸操縱子)PTac（來源於Lac和Trp的雜合啟動子）強轉錄終止序列核糖體結合位點（S-D序列）、起始密碼子、終密碼止子等3基因重組技術

3.4基因重組技術的載體

3.4.3質粒載體*pGEX表達質粒載體*酵母是一類單細胞的真核生物，作為一種真核生物表達系統，其優勢在於：基因表達調控機理比較清楚，遺傳操作相對簡單；具有真核生物蛋白翻譯後修飾加工系統；不含有特異性病毒，不產毒素，較為安全；發酵工藝簡單，成本低廉；能將外源基因表達產物分泌至培養基中。3基因重組技術

3.4基因重組技術的載體

3.4.4酵母載體*按載體在酵母細胞中的複製形式分類酵母整合載體（yeastintegratingvector）酵母人工染色體（yeastartificialchromosome）質粒載體酵母附加型質粒（yeastepisomalplasmid,YEp）酵母複製質粒（yeastreplicatingplasmid,YRp）酵母著絲粒質粒（yeastcentromereplasmid,YCp）3基因重組技術

3.4基因重組技術的載體

3.4.4酵母載體******

基因重組技術

*3基因重組技術

3.1概述

3.1.1定義基因重組技術是一種在分子水準上按照人們設計的藍圖對基因進行人工操作的技術，具體地說，就是從一種細胞中把目的基因提取出來，在體外把它和一種載體分子連接，然後用人工的方法將這種雜種DNA分子引入到另一種細胞中去，讓其大量複製繁殖或產生大量基因表達產物。*3基因重組技術

3.1概述

3.1.1定義別稱：基因工程（Geneengineering）DNA重組(DNArecombination)遺傳工程(Geneticengineering)基因操作(Genemanipulation)基因克隆(Genecloning)分子克隆(Molecularcloning)……*目的基因的分離；重組載體的選擇和製備；目的基因與載體的重組；重組體導入受體細胞；重組克隆的篩選與鑒定；目的基因在受體細胞中的表達及表達產物的分離純化。3基因重組技術

3.1概述

3.1.2基因重組技術的主要內容和步驟基因重組技術的主要內容*分離重組轉化表達篩選載體基因重組技術的主要步驟*定義是一類以環狀或線性雙鏈DNA為底物，能識別DNA中特定核苷酸序列，並在合適反應條件下使每條鏈的一個磷酸二酯鍵斷開，產生具3’-OH和5’-P基團DNA片段的內去氧核苷酸酶(endo-deoxyribonuclease)。簡稱限制性內切酶、限制酶、內切酶。3基因重組技術

3.2基因重組技術的工具酶

3.2.1限制性核酸內切酶(Restrictionendonuclease)——分子剪刀*種類目前，已從近300種不同的微生物分離出約500種限制性核酸內切酶。類型（三種類型）?型酶、??型酶和???型酶。若無說明，通常的限制性核酸內切酶就是指??型酶。*三