蛋白质的共价结构课件.pptVIP

（二）、末端氨基酸殘基的鑒定、末端分析2CC末端AAα氨基醇②還原法硼氫化鋰肽鏈外切酶:從多肽鏈C-端逐個水解根據不同反應時間釋放出的AA種類和數量蛋白質C-末端殘基順序。四種羧肽酶：A,B,C和Y；A和B(胰髒)、C(柑桔葉)、Y(麵包酵母)∽A:除Pro/Arg/Lys/外所有C-末端AA殘基∽B:只水解Arg和Lys為C-末端殘基的肽鍵③羧肽酶法（二）、末端氨基酸殘基的鑒定、末端分析2C（三）、二硫鍵的斷裂鹽酸胍/尿素解離多肽鏈間的非共價力。應用過甲酸氧化法或巰基還原法拆分多肽鏈間的二硫鍵。1、酸水解（四）、氨基酸組成的分析2、堿水解1、酶解法:內切酶：胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶外切酶：羧肽酶和氨肽酶多肽鏈的選擇性降解（五）、多肽鏈的部分裂解和肽段混合物的分離純化R1=Lys（K）和Arg（R）專一性較強，水解速度快R2=Pro（抑制）肽鏈水解位點胰蛋白酶trypsinR1=Phe（F）、Trp（W）Tyr（Y）等疏水性AALeu、Met和His稍慢R2=Pro（抑制）pH8-9肽鏈水解位點糜蛋白酶/胰凝乳蛋白酶（chymotrypsin）水解速度與相鄰AA性質有關:酸性：-/鹼性：+R2=Phe（F）、Trp（W）、Tyr（Y）、Leu（L）、Ile（I）、Met（M）、Val（V）及其它疏水性強的AA水解速度較快肽鏈水解位點R2=Pro或Gly，不水解R1或R3=Pro，抑制水解嗜熱菌蛋白酶（thermolysin)R1和/或R2＝Phe（F）、Trp（W）、Tyr（Y）、Leu（L）及其它疏水性AA水解速度較快R1=Pro（抑制）pH2肽鏈水解位點胃蛋白酶Pepsin肽鏈水解位點羧肽酶和氨肽酶2、化學裂解法①溴化氰水解法(Cyanogenbromide)——選擇性地切割由Met羧基形成的肽鍵。（五）、多肽鏈的部分裂解和肽段混合物的分離純化多肽鏈的選擇性降解②NH2OH斷裂：較專一性斷裂Asn-Gly之間的肽鍵Asn-Leu及Asn-Ala鍵也能部分斷裂二、肽（peptide）AA-NH2與另一AA-COOH間失水形成的醯胺鍵稱肽鍵，所形成的化合物稱肽。由兩個AA組成的肽稱為二肽。由多個AA組成的肽則稱為多肽。組成多肽的AA單元稱為氨基酸殘基。多肽鏈中AA殘基按一定順序排列：氨基酸順序含游離?-氨基的一端：氨基端或N-端含游離?-羧基的一端：羧基端或C-端AA順序是從N-端開始以C-端氨基酸殘基為終點如上述五肽：Ser-Val-Tyr-Asp-Gln（一）、肽和肽鍵的結構①肽鍵中C-N鍵有部分雙鍵性質——不能自由旋轉②組成肽鍵原子處於同一平面（肽平面）③鍵長及鍵角一定④大多數情況以反式結構存在共價主鏈（二）、肽的物理化學性質肽末端α-羧基pKa值比游離AA中的大。肽末端α-氨基pKa值比游離AA中的小。等電點（兩性）。酸鹼性質取決於：—α-羧基、α-氨基、側鏈基團的解離具有雙縮脲反應——Pr特有的反應。（三）、天然存在的重要多肽三、蛋白質一級結構的測定什麼是Pr的一級結構？蛋白質中氨基酸的排列順序。1.樣品必需純（97%以上）2.知道蛋白質的分子量3.知道蛋白質由幾個亞基組成4.測定蛋白質的AA組成並根據分子量計算每種AA的個數5.測定水解液中的氨量計算醯胺的含量前提（一）、蛋白質測序策略(1)測定蛋白質分子中多肽鏈的數目通過測定末端氨基酸殘基的摩爾數與蛋白質分子量之間的關係，即可確定多肽鏈的數目。蛋白質一級結構的測定（一）、蛋白質測序策略(2)多肽鏈的拆分蛋白質一級結構的測定（一）、蛋白質測序策略幾條多肽鏈借助非共價鍵連接在一起，稱為寡聚蛋白質，血紅蛋白為四聚體，烯醇化酶為二聚體。可用8mol/L尿素或6mol/L鹽酸胍處理，即可分開多肽鏈(亞基)。蛋白質一級結構的測定（一）、蛋白質測序策略(3)斷開二硫鍵在8mol/L尿素或6mol/L鹽酸胍存在下，用過量的?-巰基乙醇處理，使二硫鍵還原為巰基，然後用烷基化試劑保護生成的巰基，防止重新被氧化。蛋白質一級結構的測定（一）、蛋白質測序策略蛋白質一級結構的測定(4)測定每條多肽鏈的AA組成，並計算出AA成分的分子比