LncRNA34962调控miRNA-3575_c-Myc在左心疾病相关性肺动脉高压中的作用机制研究.pdfVIP

福建医科大学硕士学位论文

目录

中文摘要1

英文摘要4

引言8

材料与方法10

1实验材料10

1.1实验动物10

1.2主要试剂与耗材10

1.3主要抗体12

1.4主要仪器与设备13

1.5主要溶液的制备14

2实验方法14

2.1PH-LHD大鼠模型建立及标本获取14

2.2-HE16

苏木素伊红染色（染色）

2.3转录组学测序17

2.4生信分析预测LncRNA/miRNA/mRNA通路18

2.5大鼠PASMCs原代培养18

2.6Westernblot检测目的蛋白表达水平21

2.7RT-qPCR检测RNA表达水平24

福建医科大学硕士学位论文

2.8荧光原位杂交29

2.9细胞转染30

2.10CCK8实验检测PASMCs增殖能力31

2.11划痕实验检测PASMCs迁移能力31

2.12双荧光素酶报告基因32

2.13大鼠气管内滴注血清AAV9病毒33

3统计学方法33

结果35

1.PH-LHD大鼠模型的建立35

1.1大鼠心脏彩超35

1.2大鼠左房压、右室压测量37

1.3大鼠心脏称重38

2.HE38

大鼠肺动脉染色

3.全转录组学测序39

3.1样本生物学重复相关性检测39

3.2差异表达基因筛选与验证39

3.3LncRNA靶基因预测41

3.4生信分析预测LncRNA/miRNA/mRNA通路42

3.5WB检测肺动脉中目的蛋白含量44

福建医科大学硕士学位论文

3.6PASMCs原代培养及鉴定44

3.7荧光原位杂交确认LncRNA34962位于细胞质中45

3.8过表达LncRNA34962可促进PASMCs的增殖迁移45

3.9干扰LncRNA34962可抑制PASMCs的增殖迁移50

3.10LncRNA34962、c-Myc与miRNA-3575结合位点的验证...55

3.11干扰LncRNA35962，可缓解PH-LHD大鼠肺动脉重构57

讨论59

结论63

参考文献63

中英文缩略词表68

综述69

致谢77

福建医科大学硕士学位论文

LncRNA34962调控miRNA-3575/c-Myc在左心疾病相关性

肺动脉高压中的作用机制研究

摘要

背景：肺动脉高压（pulmonaryhypertension，PH）是一种以肺血管异常收

缩和阻力进行性升高为主要表现的严重进展性疾病。由左心疾病引起的PH称

为左心疾病相关性肺动脉高压（pulmonaryhypertensionduetoleftheartdisease，

PH-LHD），肺血管重构是其主要病理生理特征。由于肺血管重构的机制尚不

清，各种针对肺血管重构的靶向药物治疗效果有限，以至于临床上对PH-LHD

的治疗依然棘手。

目的：本研究利用转录组学测序以及生物信息学分析，筛选与肺动脉平滑

肌细胞（pulmonaryarterialsmoothmusclecells，PASMCs）增殖迁移相关的长

链非编码RNA（Longnon-codingRNA，LncRNA），探究LncRNA通过竞争

性内源RNA（competingendogenousRNA，ceRNA）假说调控PASMCs增殖

迁移参与肺血管重构促进PH-LHD发生发展的可能机制，以期寻求PH-LHD

疾病早期治疗的有效靶点。

方法：通过升主动脉缩窄术（Banding）建立PH-LHD大鼠模型。PH-LHD

组以及假手术（Sham）组大鼠术后63天，经心脏彩超、血流动力学