离心层析电泳技术.pptVIP

第1页，共39页，星期日，2025年，2月5日常用临床生物化学分析技术主要介绍：离心技术、层析技术、电泳技术，在临床生物化学中的应用及应该注意的基本知识物质的分离技术最普遍使用的有三大类，即离心技术、层析技术、电泳技术。它们是三项基本的实验室分离技术。第2页，共39页，星期日，2025年，2月5日一.离心技术：简介：离心现象是指物体在离心力场中表现的沉降运动现象，应用离心沉降进行物质的分析和分离的技术称为离心技术。离心技术是根据颗粒在作匀速圆周运动时受到一个外向的离心力的作用而发展起来的。尤其在生化检验方面，离心机是分离细胞、细胞器和生物大分子如核酸、蛋白质等必不可少的工具。第3页，共39页，星期日，2025年，2月5日最简单的离心机由一个转头和一个驱动器组成，转头用来承载待处理的样品，驱动器则用来使转头以一定角速度作圆周运动以获得离心力。现代化的离心机再辅以各种附属装置以保证转头的工作质量，维持一定工作环境或特定目的，并广泛采用电脑控制。第4页，共39页，星期日，2025年，2月5日（一）.离心技术的分类1.根据离心方法分类：（1）.平衡离心法：①差速离心法：利用样品中各种组分的沉降系数不同而进行的分离方法。②速率区带离心法:：是根据样品中不同组分离子所具有的不同的体积尺寸大小和不同的沉降系数将混合样品进行离心分离提纯。.（2）.等密度离心法：又称等比重离心法，以离子密度进行分离。第5页，共39页，星期日，2025年，2月5日（3).经典式沉降平衡离心法：在分析离心方法中是最常用的，用于生物大分子分子量的测定、纯度估计、了解构象变化等。第6页，共39页，星期日，2025年，2月5日2.依据离心机转头的旋转速度分类：(1).低速离心：（4000r/min以内）(2).高速离心：（20000r/min，最大相对离心率可达45000g）(3).超速离心：（30000r/min以上，最大相对离心率达645000g）第7页，共39页，星期日，2025年，2月5日3.按照离心技术的实际应用分类：(1).普通离心(2).专用离心(3).制备型离心(4).分析型离心第8页，共39页，星期日，2025年，2月5日（二）.各类型离心机的特点和应用：1.低速离心机(1).锥形台式离心机：体积小、重量轻、容量大，能自动控制工作时间，操作简便，使用方便，适用于医院检验科，生物化学化验室等对样品的初级处理。(2).水平型桶式离心机(3).大容量立式离心机(4).带冷冻系统的大容量低速离心机第9页，共39页，星期日，2025年，2月5日2.高速离心机：由于运转速度快，一般多配备冷冻控温装置，适用于各种生物细胞、病毒、血浆蛋白等有机物、无机物溶液、悬浮液及胶体溶液中有形成份的浓缩、提取、制备等工作，它是细胞生物学和分子生物水平研究的重要工具。第10页，共39页，星期日，2025年，2月5日3.超速离心机：（1）.制备型超速离心机：是临床医学、生物学、生物化学等研究领域重要仪器之一，利用高速回转所产生的巨大离心力对细胞器、病毒、生物大分子进行分离、浓缩和精致。第11页，共39页，星期日，2025年，2月5日（2）.分析型超速离心机：一般都装备有特殊设计的转头和控制系统，利用光学系统可直接观察和分析样品的沉降情况，利用特殊配备的数据处理机自动计算沉降系数、分子量。它主要用于生物大分子的分子量测定，评价样品纯度和检测生物大分子结构组态的变化等。第12页，共39页，星期日，2025年，2月5日（三）.操作中注意事项：普通医用离心机转速稍低，最常用，也最容易忽视安全，使用时必需每次做到：（1）.用前检查离心机电源开关，调速器等都应在起动状态（即每次用后应关好开关，退回调速器至起点）。第13页，共39页，星期日，2025年，2月5日（2）.平衡转头上相对两管至等重：水平转头常连套管在一起，在灵敏度0.1g的天平上平衡至等重，平衡时要检查套管内有无损伤或以前破管时残留物，否则要先洗净，以免再次引起破管。角度转头只能用配管平衡，不能在转头的插孔中随意加水或放空管去平衡。第14页，共39页，星期日，2025年，2月5日使用高速和超速离心机必须严格按操作说明书操作！原则上应牢记，大型机一旦发生操作事故，必比普通机严重百倍！第15页，共39页，星期日，2025年，2月5日二.层析技术：（一）.简介：层析技术是一种现在已经广泛使用的物理化学分析法，是色层分析法或色谱分析法的简称。第16页，共39页，星期日，