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鸡传染性法氏囊病病毒JS株VP2蛋白重组腺病毒：构建、特性与应用前景

一、引言

1.1研究背景与意义

鸡传染性法氏囊病（InfectiousBursalDisease，IBD）是由鸡传染性法氏囊病病毒（InfectiousBursalDiseaseVirus，IBDV）引起的一种对养鸡业危害极大的急性、高度接触性传染病。该病主要侵害3-12周龄的雏鸡与青年鸡，尤其是3-6周龄的雏鸡最为易感。IBDV会特异性地感染并破坏鸡的法氏囊这一重要的中枢免疫器官，导致法氏囊发生炎症、萎缩和纤维化等病变。这使得鸡体内的B淋巴细胞发育受阻、数量减少，从而引发免疫抑制。免疫抑制后的鸡群对其他疾病的抵抗力大幅下降，极易遭受多种并发和继发性病毒或细菌感染，如新城疫病毒、大肠杆菌等，显著增加了鸡群的发病率和死亡率。

IBD在全球范围内广泛传播，给养鸡业带来了沉重的经济负担。一方面，患病鸡只的生长发育受到抑制，饲料转化率降低，导致养殖成本上升；另一方面，病鸡和死鸡的淘汰以及高昂的治疗费用，都严重影响了养鸡业的经济效益。自1957年该病首次在美国被发现以来，迅速蔓延至世界各地，我国自1979年首次报道以来，也一直深受其害，近年来随着养鸡业规模化发展，IBD的防控形势依然严峻。

VP2蛋白是IBDV的主要结构蛋白，也是最主要的免疫原性蛋白。它在病毒的组装和感染过程中发挥着关键作用，同时在宿主体内可诱导产生中和抗体，对病毒感染起到免疫保护作用。VP2蛋白的氨基酸序列存在一定的变异性，尤其是高变区的氨基酸突变，会导致病毒抗原性的改变，这也是现有疫苗免疫失败的重要原因之一。因此，深入研究VP2蛋白的结构与功能，以及其与宿主免疫反应的相互作用机制，对于开发更有效的IBD疫苗具有重要意义。

传统的IBD疫苗主要包括活疫苗和灭活疫苗。活疫苗虽然免疫效果较好，但存在毒力返强、免疫抑制以及受母源抗体干扰等问题；灭活疫苗安全性高，但免疫原性相对较弱，需要多次免疫且免疫期较短。随着分子生物学技术的飞速发展，基因工程疫苗成为研究热点，其中重组腺病毒疫苗具有诸多优势。重组腺病毒作为基因治疗和疫苗开发的重要载体，具有宿主细胞范围广、转移效率高、滴度高及表达水平高等特点。它可以将IBDV的VP2基因导入宿主细胞，使其表达VP2蛋白，从而诱导机体产生特异性的免疫应答。同时，重组腺病毒疫苗还可以避免传统疫苗的一些缺点，如毒力返强和免疫抑制等问题，具有良好的应用前景。

本研究旨在构建表达鸡传染性法氏囊病病毒JS株VP2蛋白的重组腺病毒，并对其免疫特性进行研究。通过本研究，有望为IBD的防控提供一种新型、高效、安全的基因工程疫苗，为养鸡业的健康发展提供有力的技术支持。同时，本研究也将丰富对IBDV的分子生物学和免疫学认识，为进一步深入研究IBDV的致病机制和疫苗研发提供理论依据。

1.2国内外研究现状

在鸡传染性法氏囊病的研究方面，国外早在1957年就首次发现了该病，随后对IBDV的生物学特性、致病机制等展开了深入研究。明确了IBDV属于双RNA病毒科禽双RNA病毒属，其基因组由A、B两个片段组成。A片段编码VP2、VP3、VP4和VP5蛋白，其中VP2蛋白是主要的免疫原性蛋白，其高变区氨基酸的变异与病毒的抗原性改变密切相关；B片段编码VP1蛋白，在病毒RNA复制过程中发挥关键作用。在病毒的传播与感染机制研究中，证实了IBDV主要通过呼吸道、消化道和眼结膜等途径传播，感染鸡只后特异性地破坏法氏囊中的B淋巴细胞，引发免疫抑制。

在疫苗研发领域，国外取得了一系列成果。早期研发的活疫苗，如弱毒疫苗，通过对病毒进行连续传代使其毒力减弱，虽能在一定程度上诱导鸡群产生主动免疫，但存在毒力返强和免疫抑制等风险。随着技术的发展，基因工程疫苗成为研究热点，如利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达IBDV的VP2蛋白，制备重组亚单位疫苗。这种疫苗具有安全性高的优点，但生产工艺复杂，成本较高，且部分表达系统存在不能诱导中和性抗体或无法兼顾高保护力和避免法氏囊损伤的问题。此外，核酸疫苗，尤其是DNA疫苗的研究也在不断推进，匈牙利学者Fodor等构建了IBDV-D78株和GP40株的VP2基因及D78株的VP2/VP4/VP3真核表达质粒，免疫SPF鸡后观察免疫反应和保护效果，但存在需要大剂量DNA疫苗维持免疫反应以及保护率有限等问题。

国内对鸡传染性法氏囊病的研究起步相对较晚，自1979年首次报道以来，在病毒的分离鉴定、流行病学调查等方面做了大量工作。研究发现我国存在经典型、